动物疫苗细胞悬浮培养技术研发实验室建设项目爱科验收表(编辑修改稿)

动物疫苗细胞悬浮培养技术研发实验室建设项目爱科验收表(编辑修改稿)内容摘要：

0L 一 致CO2气 体 气 体 ， 15kg/瓶 6 瓶 6 瓶 一 致氧 气 气 体 ， 15kg/瓶 1 瓶 1 瓶 一 致 水 源 及 水 平 衡本 项 目 用 水 主 要 包 括 器 皿 清 洗 用 水 、 实 验 室 保 洁 用 水 、 实 验 服 清 洁 用 水 、 配液 用 水 、 生 活 用 水 、 高 压 锅 、 蒸 汽 发 生 器 、 水 浴 锅 用 水 ， 由 高 新 区 市 政 供 水 管 网提 供。 项 目 劳 动 定 员 6 人 ， 年 工 作 256 天。 本 项 目 废 水 来 源 于 器 皿 清 洗 废 水 、 实 验 室 保 洁 废 水 、 实 验 服 清 洗 废 水 ， 生 活污 水。 器 皿 清 洗 废 水 、 实 验 室 保 洁 废 水 、 实 验 服 清 洗 废 水 经 1 套 “ 沉 淀 +二 氧 化氯 消 毒 ”装 置 处 理 后 ， 与 生 活 污 水 一 起 进 入 电 子 电 器 产 业 园 化 粪 池 进 一 步 处 理 ，12最 终 通 过 市 政 管 网 排 入 双 桥 污 水 处 理 厂 进 一 步 处 理。 经 监 测 器 皿 清 洗 废 水 、 实 验室 保 洁 废 水 、 实 验 服 清 洗 废 水 排 放 量 为 ， 由 于 无 法 单 独 监 测 生 活 污 水 量 ，根 据 建 设 单 位 提 供 的 资 料 ， 生 活 污 水 量 为。 项 目 废 水 排 放 量。 本 项 目 水 平 衡 图 见 图 1。 器 皿 清 洗 净 水 地 面 保 洁 验 服 清 洗 办 公 生 活 蒸 馏 水 器 配 废 压 锅 、 蒸 汽 发 生 器 、 水 浴 （ 纯 净 水 ）污 水 处 理 设 化 粪 池双 桥 污 水 处 理 厂排 放 1 项 目 水 平 衡 示 意 图 （ 单 位 m3/d）13主 要 工 艺 流 程 及 产 污 环 节 （ 附 处 理 工 艺 流 程 图 ， 标 出 产 污 节 点 ） 研 发 工 艺 流 程本 项 目 为 动 物 疫 苗 细 胞 悬 浮 培 养 技 术 研 发 实 验 室 建 设 项 目 ， 利 用 公 司 已 经 建立 的 成 熟 悬 浮 培 养 传 代 细 胞 MDCK、 VeroE Marc14 ST、 F81 等 ， 进 行 猪流 行 性 腹 泻 病 毒 、 猪 伪 狂 犬 病 毒 ， 水 貂 犬 温 热 病 毒 和 水 貂 细 小 病 毒 疫 苗 的 研 发。 因 每 一 种 病 毒 的 培 养 特 性 不 同 ， 这 些 病 毒 的 悬 浮 培 养 技 术 工 艺 需 要 进 一 步 的 优化。 本 项 目 主 要 进 行 工 艺 技 术 的 研 发 ， 将 优 化 成 功 的 技 术 成 果 转 让 给 疫 苗 生 产 企业 使 用 ， 对 企 业 做 技 术 服 务。 本 项 目 具 体 工 艺 流 程 为 ： 细 胞 复 苏 → 贴 壁 细 胞 培 养→ 病 毒 繁 殖 → 悬 浮 培 养 → 澄 清 → 病 毒 灭 活 → 纯 化 → 无 菌 过 滤 → 乳 化 → 分 装 → 成品。 具 体 研 发 工 艺 流 程 如 下 ：（ 1） 细 胞 复 苏将 冷 冻 在 196℃ 液 氮 中 的 细 胞 快 速 融 化 ， 使 细 胞 外 冻 存 时 的 冰 晶 迅 速 融 化 ，具 体 操 作 是 迅 速 将 冻 存 管 投 入 到 已 经 预 热 的 水 浴 锅 （ 水 浴 温 度 为 40℃ ） 中 复 苏 ，复 苏 后 细 胞 移 至 细 胞 瓶 中 ， 加 入 培 养 基 溶 液 及 小 牛 血 清 ， 于 37℃ 的 5%的 CO2细 胞 培 养 箱 中 培 养 3~4d。 此 过 程 会 产 生 废 弃 的 细 胞 瓶 、 微 量 培 养 废 气。 （ 2） 贴 壁 细 胞 培 养从 细 胞 培 养 箱 中 取 出 细 胞 瓶 ， 倒 掉 原 培 养 基 溶 液 ， 用 磷 酸 盐 缓 冲 液 漂 洗 两 遍细 胞 瓶 ， 倒 掉 磷 酸 盐 缓 冲 液 ， 加 入 配 制 好 的 EDTA胰 酶 溶 液 ， 放 回 37℃ 培 养 箱消 化。 取 出 细 胞 瓶 ， 加 入 培 养 基 溶 液 及 小 牛 血 清 ， 吹 打 均 匀 ， 于 37℃ 的 5%的CO2 细 胞 培 养 箱 中 培 养 3~4d。 贴 壁 细 胞 培 养 过 程 中 会 产 生 废 培 养 液 、 废 磷 酸 盐 缓 冲 液 、 废 弃 细 胞 瓶 、 微 量培 养 废 气。 （ 3） 病 毒 繁 殖将 来 自 疫 苗 厂 家 的 病 毒 毒 种 经 分 子 生 物 学 鉴 定 合 格 后 按 照 一 定 比 例 接 种 至单 层 贴 壁 细 胞 中 ， 置 于 37℃ 的 5%二 氧 化 碳 细 胞 培 养 箱 中 培 养 3~4 天 ， 收 获 于20℃ 冰 箱 冻 存。 此 过 程 会 产 生 废 培 养 液 、 废 细 胞 瓶 、 微 量 病 原 微 生 物 气 溶 胶。 （ 4） 细 胞 悬 浮 培 养① 摇 瓶 细 胞 悬 浮 培 养细 胞 间 的 超 净 工 作 台 经 紫 外 线 照 射 消 毒 后 ， 准 备 好 培 养 基 和 摇 瓶 ， 复 苏 后 的14细 胞 经 初 步 培 养 后 转 移 后 摇 瓶 中 逐 步 扩 增 培 养 ， 摇 瓶 和 培 养 基 液 的 用 量 逐 步 扩大 ， 细 胞 按 比 例 传 代。 置 于 37℃ 的 5%二 氧 化 碳 细 胞 培 养 箱 中 培 养。 ② 细 胞 悬 浮 培 养 罐 细 胞 悬 浮 培 养细 胞 悬 浮 培 养 罐 主 要 为 细 胞 代 谢 提 供 一 个 适 宜 的 生 长 环 境 ， 使 细 胞 能 够 快 速大 量 增 殖。 细 胞 悬 浮 培 养 罐 先 经 蒸 汽 灭 菌 ， 然 后 在 细 胞 间 的 超 净 工 作 台 中 接 种 摇瓶 悬 浮 培 养 好 的 细 胞 ， 经 扩 增 后 的 细 胞 被 转 入 5L 细 胞 悬 浮 培 养 罐 进 行 悬 浮 培 养 ，随 后 转 入 40L 的 细 胞 悬 浮 培 养 罐 悬 浮 培 养 ， 加 入 相 应 需 求 量 的 培 养 基 液 ， 控 制培 养 温 度 为 37℃ ， 以 使 细 胞 能 够 正 常 繁 殖 ， 补 充 通 入 一 定 量 的 压 缩 空 气 、 O2和CO2， 调 节 溶 液 的 pH， 细 胞 通 过 呼 吸 作 用 也 释 放 出 少 量 的 CO2， 因 此 该 过 程 会有 少 量 以 CO2等 气 体 为 主 的 培 养 废 气。 ③ 病 毒 悬 浮 培 养将 病 毒 种 子 接 种 于 悬 浮 培 养 的 细 胞 ， 培 养 24 天 后 收 获 ， 置 于 20℃ 冰 箱。 细 胞 悬 浮 培 养 过 程 中 有 废 培 养 液 、 培 养 废 气 产 生。 （ 5） 病 毒 效 价 测 定培 养 好 的 细 胞 进 行 病 毒 效 价 测 定。 此 过 程 有 废 培 养 板 、 废 培 养 液 、 少 量 病 原微 生 物 气 溶 胶 产 生。 （ 6） 病 毒 液 澄 清在 细 胞 间 的 超 净 工 作 台 中 ， 向 病 毒 液 倒 入 PEG6000， 于 4℃ 冰 箱 中 静 置 过 夜 ，然 后 用 离 心 机 离 心 澄 清 ， 取 样 检 测 病 毒 效 价。 此 过 程 有 废 液 产 生。 （ 7） 病 毒 液 灭 活取 合 格 病 毒 液 加 2溴 乙 胺 氢 溴 酸 盐 进 行 灭 活 ， 于 37℃ 静 置 48 小 时 ， 再 加 入硫 代 硫 酸 钠 终 止 灭 活 ， 取 样 ， 加 入 细 胞 瓶 中 培 养 3 天 ， 盲 传 3 代 ， 用 显 微 镜 观 察有 无 细 胞 病 变 ， 确 定 灭 活 彻 底。 此 过 程 中 有 废 病 毒 液 产 生。 （ 8） 纯 化灭 活 后 的 病 毒 液 先 经 PVDF 中 空 纤 维 柱 超 滤 膜 浓 缩 ， 然 后 取 样 检 测 病 毒 效价。 病 毒 液 流 经 中 空 纤 维 柱 时 ， 大 部 分 有 效 组 分 被 截 留 在 中 空 纤 维 柱 中 ， 少 部 分随 液 体 流 出。 即 得 到 纯 化 后 的 病 毒 液。 用 2%氢 氧 化 钠 溶 液 冲 洗 中 空 纤 维 柱 ， 此过 程 有 废 液 产 生。 15中 空 纤 维 柱 浓 缩 液 再 通 过 层 析 柱 分 子 筛 纯 化 ， 进 而 获 得 高 纯 度 病 毒 抗 原。 分 子 筛 层 析 又 称 为 凝 胶 过 滤 层 析 或 体 积 排 阻 层 析。 分 子 筛 层 析 是 利 用 有 一 定孔 径 范 围 的 多 孔 凝 胶 作 为 固 定 相。 对 混 合 物 中 各 组 分 按 分 子 大 小 进 行 分 离 的 层 析技 术。 经 过 装 柱 ， 上 样 ， PBS 洗 脱 获 得 高 纯 度 的 病 毒 液 ， 此 过 程 有 废 液 产 生。 （ 9） 无 菌 过 滤高 纯 病 毒 液 经 囊 式 过 滤 器 过 滤 除 菌 ， 此 过 程 有 废 囊 式 过 滤 器 产 生。 （ 10） 乳 化病 毒 抗 原 与 疫 苗 佐 剂 206 按 照 1:1 体 积 比 混 匀 ， 制 备 疫 苗。 （ 11） 疫 苗 分 装在 细 胞 间 的 层 流 罩 内 用 灌 装 加 塞 扎 盖 机 分 装。 （ 12） 成 品 检 验制 得 的 成 品 不 流 向 市 场 ， 委 托 第 三 方 进 行 安 全 检 验 和 效 能 评 价。 生 产 工 艺 流 程 及 产 污 环 节 示 意 图 见 图 2。 灭 活 方 式 、 工 艺所 有 涉 及 病 原 微 生 物 的 固 废 均 经 高 温 高 压 灭 菌 处 理 后 委 托 有 资 质 单 位 处 理 ，重 复 使 用 的 接 触 病 毒 器 皿 经 高 温 高 压 灭 菌 处 理 后 清 洗。 项 目 产 生 的 含 病 原 微 生 物固 废 均 装 入 专 用 灭 菌 袋 ， 统 一 由 灭 菌 锅 经 121℃ 、 压 力 不 小 于 103kPa， 40min 湿热 灭 菌 后 暂 存 于 危 险 废 物 暂 存 间。 为 保 证 灭 菌 锅 的 消 毒 效 率 ， 建 设 单 位 应 严 格 按照 验 证 规 程 ， 检 查 设 备 是 否 处 于 正 常 状 态 ， 定 期 对 灭 菌 锅 的 处 理 效 果 做 例 行 检 测 ，检 测 频 率 为 每 年 不 少 于 1 次。 16贴 壁 细 胞 培 养培 养 基 溶 液 、 小 牛 血 清佐 剂 206细 胞 复 苏澄 清纯 化乳 化成 品无 菌 过 滤分 装病 毒 灭 活悬 浮 培 养来 自 疫 苗 厂 家 的 病 毒生 物 分 子 学 鉴 定 病 毒 繁 殖 G、SG、 S G、SG、SSSS S W废 水G废 气S固 废 （ 包 括 废 液 ）G、S细 胞图 2 本 项 目 生 产 工 艺 流 程 及 产 污 环 节 示 意 图 产 污 环 节项 目 的 产 污 环 节 见 表 9。 表 9 本 项 目 主 要 污 染 工 序 一 览 表类 别 产 污 环 节 污 染 物 污 染 因 子废 气 研 发 过 程 细 胞 培 养 废 气 及 病 原 微 生 物气 溶 胶 CO O 微 生 物 气 溶 胶研 发 过 程 乙 醇 废 气 乙 醇消 毒 工 序 消 毒 异 味 异 味17废 水 器 皿 清 洗 器 皿 清 洗 废 水 pH、 COD、 BOD 氨 氮 、 SS实 验 室 保 洁 实 验 室 保 洁 废 水 pH、 COD、 BOD 氨 氮 、 SS实 验 服 清 洗 实 验 服 清 洗 废 水 pH、 COD、 氨 氮 、 SS职 工 办 公 生 活 污 水 pH、 COD、 BOD NH3N、 SS噪 声 研 发 过 程 空 调 外 挂 机 、 空 气 压 缩 机 、离 心 机 、 风 机 、 西 淋 瓶 灌 装加 塞 扎 盖 机 运 行 时 噪 声 设 备 运 行 机 械 噪 声固 体废 物 研 发 过 程 实 验 废 液 危 险 废 物含 有 危 险 化 学 品 的 废 包 装 物废 试 剂废 弃 耗 材废 活 性 炭职 工 办 公 生 活 生 活 垃 圾 一 般 固 废 项 目 变 动 情 况本 项 目 建 设 过 程 中 未 发 生 重 大 变 动 ， 建 成 后 规 模 不 变 、 设 备 不 变 、 生 产 工 艺不 变 、 主 要 变 动 情 况 为 环 保 设 施 的 变 动。 项 目 环 保 设 施 变 动 情 况 见 表 10。 表 10 项 目 环 保 设 施 内 容 变 动 情 况 一 览 表类 别 环 评 及 批 复 建 设 内 容 实 际 建 设 内 容 相 符 性固 废 治 理 1 座 2危 废 暂 存 间 2 个 不 锈 钢 材 质 危 废 暂 存 间 总 面 积不 变变 动 情 况 分 析 ：根 据 环 评 及 批 复 ， 实 验 室 设 置 1 座 废 暂 存 间 ， 实 际 建 设 2 个 锈 钢 材 质 的 危 废 暂 存 间 ， 总 面 积 与 环 评 及 批 复 一 致。 综 上 ， 本 项 目 危 废 暂 存 间 由 1 座 更 至 2 座 ， 总 面 积 保 持 不 变 ，因 此 本 项 目 的 变 动 情 况 不 属 于 重 大 变 动。 18表 三主 要 污 染 源 、 污 染 物 处 理 和 排 放 （ 附 处 理 流 程 示 意 图 ， 标 出 废 水 、 废 气 、 厂 界噪 声 监 测 点 位 ） 废 水 污 染 物 治 理 及 处 置 设 施从 研 发 工 艺 流 程 可 知 ， 本 项。