外文翻译----关于柑橘青果病的两种韧皮部杆菌的pcr检测(编辑修改稿)

外文翻译----关于柑橘青果病的两种韧皮部杆菌的pcr检测(编辑修改稿)内容摘要：

于南非、津巴布韦、中国、印度、印尼、尼泊尔、菲律宾、台湾、泰国的黄龙病病原感染的甜橙叶片提取物 泳道 （ 标记为 3～ 11泳道 ）。 在加了水或者是健康甜橙提取物的 没有扩增物出现 中。 不管出现黄龙病菌是否在底物 OI2c/OI1()， OI2c/OIA()和 OI2c/OI1/OIA (Fig. 3C)被用到，典型的 1160bp条 带 只能在经感染的甜橙叶片的提取液中才能 被观察到。 相反，当 PCR的进行用 OI2c/O1A(Fig. 3B)， 1160bp只能在非洲、亚洲的提取物中获得， 它们得到的都很少或者是根本没有被扩增。 这一步骤可以在同一种植物的独立提取液中重复操作，并且总是会得出一致的结果。 另外，这种扩增的条 带 比方法一 (Fig. 3 pared with )中的更为敏感。 植物样品采集和保存的环境 本科毕业论文 （或设计） 外文翻译 4 采用新鲜的叶片中脉得到的扩增产物相当好，叶片干燥后 2025℃情况下 2放在工作台上，用硅酸保存几天，或者是在冰柜里放在塑料袋子中可以保存达 3周， 且 没有发酵发生。 经冰冻达 3周的中脉能降低 PCR的灵敏度，如果是从发酵或者是腐烂的的叶片中提取的清液不能够 PCR，即使是用针对 16SrDNA万能底物还是用韧皮部杆菌特异性底物。 阳性导出液依然有阳性扩增产物当它们被检测，即使是在冷冻在 20℃或保存在 4℃的冰柜中放置高达 6个月。 以上描述的实验操作可以 用。 其中叶片中脉的重量高达 1g的情况下 一样能够进行 ，容器中高效缓冲液于叶片的比例是 2ml： 1g。 植物提取液的蛋白酶 K孵化时间和用作 PCR的导出液的量 检验用 引 物 OI2c/OI1的 PCR产物，在多种体积量（ 2， 5， 10， 25ul）的从健康和感染柑橘叶片中准备好的导出液，蛋白酶 K孵化时间分别是 30min， 1h， 2h， 4h和 12h。 阳性扩增产物在用蛋白酶 K匀浆最低孵化 2h可以获得 ，过夜后孵化产物很容易获取。 在这些情况下，扩增产物可以用 210ul的导出液获取，但是更大量的导出液（ 25ul）对 PCR有一种抑制作用。 PCR的特异性和灵敏性 在上面我已经指出了用 引 物 OI2c/OI1对青果病菌所有 16SrDNA的扩增的特异性，对所有的韧皮部杆菌品种能够扩增，而对大肠杆菌、柯 养木杆菌，番茄顽固支原体 等却不能扩增产物形成。 我们将进一步研究韧皮部杆菌引 物的特异性在其它柑橘病原体上， 例如柑橘螺原体，杆菌顽固病菌的柔膜体纲，柑橘溃疡病的 革兰氏阴性菌，从柑橘上获得的（鲁菲不动杆菌）细菌，植物病原细菌 ,根癌病土壤杆菌，归属于相同的系统发生的丛生性和韧皮部杆菌相比。 我们也检测了植物根腐病毒感染的柑橘叶子里提取的 DNA清液的扩增产物，这种病毒（ RNA病毒）在亚洲和非洲属于一种地方病 ，和青果病、根 腐病 是相伴发生的。 图 4中第 716条 泳道 显示，从生物体或感染植物提取的 DNA清液的扩增产物，只有在用原核 16SrDNA普通 引 物情况下才能获取（ 泳道 7， 9， 11， 13， 15），而不是韧皮部杆菌的特异引 物（ 泳道 8， 10， 12， 14， 16）。 在根腐病毒感染植物的 DNA是叶绿体 16SrDNA， 这 DNA用普通引物扩增。 泳道 5和 6显示扩增产物是由亚洲菌系感染的 DNA清液获得的（浦那，印度品种），引物分别是普通引物和特异引物。 用水取代 DNA清液的调控的样品没有扩增产物形成（ 泳道 2）和从健康柑橘 上提取的 DNA清液，同预期一样，能用普通引物扩增（ 泳道 3）而不能用 韧皮部杆菌特异引物扩增。 由于青果病菌不能培养，确定 PCR的敏感性困难。 为了评价这种方法的检测极限，采用一般的受感染的中脉的量（大约 10mg到 ）和逐渐增多的健康叶片中脉（ 0到 1g）混 合 ，柑橘方法 2来安排实验。 当感染叶片为 20mg时仍然会有扩增产物获得，但是感染的叶片中脉量更少一些和健康的叶片中脉混合时就没有扩增产物获得。 扩增 DNA的特征 韧皮部杆菌 16SrDNA的序列显示， 限制性内切酶 Xbal可以将非洲菌系的 16SrDNA水解成 3个片段（ 520bp， 506bp和 130bp），亚洲菌 系的 16SrDNA水解成 2个片段（ 640bp， 520bp）。 当扩增从非洲菌系的 内尔斯普雷特 品种（南非）（图 5， 泳道 1） 、 莱塔巴 品种（南非）（泳道 2）或者哈拉雷 品种（津巴布韦）（ 泳道 3），和亚洲菌系的中国品种（ 泳道 4）、印度品种（ 泳道 5）、印度尼西亚品种（ 泳道 6）、菲尼宾品种（ 泳道 7）、台湾品种（ 泳道 8）和泰国品种（ 泳道 9）提取的 DNA被限制性内切酶 Xbal消化 ，再在 4%的琼脂糖凝胶电泳分析，得到理想的 条带 的数量和大小，这两种品种就很容易从限制性侧面来鉴别出来。 本科毕业论文 （或设计） 外文翻译 5 越南和毛里求斯收集的原始样品的 PCR评价分析 1995年 1月至 2月间，在越南北部、中部、南部多个不同果园 表现青果病特征的 54个原始样品和 1995年 4月在毛里求斯 收。