肌肉蛋白质来识别肉的种类以及加热肉品终点温度的确定(ppt58)-食品饮料(编辑修改稿)内容摘要:
料库下载 抗原的选择 • 大多数对于原料肉种类的免疫检测方法都采用多克隆方法来处理整个血 清或血清蛋白。 因为血清蛋白的存在可能是必须的,肌肉组织中残余的血浆成分会发生变化,那么便意味着肌肉组织的存在,进而可以得出结论:用这些多克隆技术来定量的估计搀杂物的量是不可靠的。 肌肉蛋白质的存在是显著的 ,预示了鸡肉 来自 料库下载 • 组织存在的可能性比血清蛋白存在的可能性要大。 对于肉种类的多克隆技术已用于可溶性粗蛋白的分析中或净化肌肉 成分,例如肌钙蛋白和肌红蛋白。 这些 检测方法的优点在于容易获得提取样品,更重要的一点在于对传统检测方法的改进与发展。 不溶性肌肉蛋白如连接蛋白 也可以用于单抗体的分析方法中,来确认原料禽肉的种类。 然而不溶性蛋白的 提取需要特殊的步骤。 这些方法毫无疑 问的可以应用于法律事件的检测中,但 来自 料库下载 • 不适用于常规检验分析或产地检验。 因为通过加热处理后,大多的蛋白质变性并且成为不可溶的, 所以使用抗体来处置本源蛋白质的方法 不可以用于加热处理过的肉类。 对于加热的肉类的确认也应用热稳定蛋白。 在解决特定种类热稳定性组成方面已做了 十分大的努力。 用 IEF方法, Jones和 Mortiner(1985)说明了 来自肾上腺和肌肉组织的 BE抗原蛋白具有热稳定性。 但是不同类型 BE抗原的特性是显著不同的, Sherikar使用 SDS聚 来自 料库下载 • 丙稀酰胺凝胶电泳的方法检测了不 同种类的 BE抗原,并且得出结论在 BE蛋白中肌钙蛋白 T 属 于特定种类蛋白部分。 没有 经 过加热处理 的从 肌肉组织中分离的具有抗热性 的 糖蛋白应用于多克隆抗体技术中。 这些抗体已应用于夹心 ELISA中用于鉴别加热和罐装肉类食物中。 这些方法在商业检测中是十分有效的, 并且也应用于 USDA对加热肉品种类确认的调查中。 大多对于加热肉品种类的 确认中大都使用多克隆抗体技术方法 .最近在 来自 料库下载 我们 实验室中对单克隆抗体技术确认加热肉种类的研究中也取得了 一 定的进 展。 用于加热处理肉类蛋白鉴别的单克隆抗体技术也可用于原料肉的鉴 别 中,因为在准备检测样品时这些原料肉可以十分容易的被加热处理。 来自 料库下载 3 单克隆抗体技术用于加热处理肌肉蛋白的确认 单克隆抗体介绍 • 用于热稳定性或抗热性蛋白的不同抗原已经用于发展抗体技术来确认加热肉品的种类。 热稳定性这一个词在字典中被十分清晰的定义,大多情况下,它指经过加热处理的肉类浸提物中保持可溶性 和抗原性的完整蛋白或蛋白碎 片。 如果一种特定分析蛋白已知应用于一种特定的种类确认 ,那么在免疫分析技术中 来自 料库下载 • 使用提纯蛋白可以增加对于特定种类抗原决定基的免疫反应机会。 然而对于杂交瘤的分泌物并不一定完全需要提纯蛋白作为抗原,由于在挑选适宜特定种类蛋白主要方面缺少足够多的知识技术, • 所以在单克隆抗体技术中我们使用加热处理过的可溶性粗肌肉蛋白作为免疫源。 在加热之后,纯的肉类蛋白质显著减少,这样在提取物中只有热稳定性或热抗性的部分蛋白质仍保持可溶性。 对期望的特性应用 MABS(单克隆抗体技术)检测 来自 料库下载 • 时应选择杂交克隆分泌物,而且必须要经过仔细的镜检和亚克隆。 对于准备抗原有两种方法 :1)用蒸馏水或盐水对粗瘦肉进行搅拌,过滤物可以作为免疫原。 • 2)瘦肉混于 ,沸水加热并且离心 .上层液 121℃ 30分钟高温灭菌过滤,用 90﹪ 乙醇进行萃取,沉淀,干燥物溶于盐溶液中备用。 来自免疫老鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合后可作为杂交产物。 在我们的实验室中, 遵 守由 Kohler 和 Milstern描述的一般程序,那便是在随后 来自 料库下载 • 的步骤中要进行必要的修饰。 ELISA镜检是用于经过选择实验的与抗 原 对应的克隆体,同时用异种的浸提物和 别的食物蛋白通过交叉反应来稳定杂交 物。 杂交产物具有我们所期望的特性 , 之后通过限定性稀释程序对之克隆至 少两次以获得稳定的单克隆细胞链。 SDSPAGE和 免疫点技术用于确 认 每种单克 隆肉类浸提物种抗原的成分。 来自 料库下载 单克隆抗体的特点 • 目前为止,五种免疫球蛋白单克隆抗体技术在实验中已用于掺杂肉种类的 检测。 单克隆抗体 2F8同五种经过加热的哺乳动物肉发生 十分强烈的反应 ,但不同任何加热的禽肉发生反应。 3E12同禽肉 反应,5D2主要用于鸡和火鸡的鉴别中。 9C6只特定于鸡, 5H9只用于猪肉。 第一 组 四种单克隆抗体技术用于经水或盐水浸 提过的经过加热处理的肌肉蛋白,它 们 同 来自 料库下载 • 特别的加热肉提取物发生了强烈的反应,但不同原料肉和加热处理后的肉相作用。 免疫印迹结果表明所有的单克隆抗体同加热处理肉提取物中两条或更多条蛋白带发生反应,除了 5H9以外,但它可检 测猪肉浸提物 中单一带。 5H9也同原料猪肉浸提物的三个蛋白带发生反应,带有 24KD的蛋白质可以被确认 为猪 肉。肌肉蛋白质来识别肉的种类以及加热肉品终点温度的确定(ppt58)-食品饮料(编辑修改稿)
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