物理图谱的构建策略研究(ppt39)-经营管理(编辑修改稿)

物理图谱的构建策略研究(ppt39)-经营管理(编辑修改稿)内容摘要：

，以 mRNA为模板经反转录合成钩状的 DNA即互补DNA (plement DNA,cDNA)，用 cDNA来标记特定染色体区域或区带上 DNA表达的区域和位置。 中国最庞大的下载资料库 • 构建方法： cDNA作图的基础是构建 cDNA文库 (library)。 以 cDNA为探针，从基因组 DNA克隆片段上寻找 编码蛋白质区域，分离出相应的特异性基因。 因 cDNA与 mRNA严格互补， cDNA直接反映了基因 中编码区域的相关序列，并确定其转译cDNA图谱可作为表达序列尤其是致病基因表达区域的识别工具。 中国最庞大的下载资料库 • 家系分离分析法 (pedigree segregate analysis)构建的遗传图谱 • 将低分辨率物理图谱与遗传图谱进行对比，整合的遗传图谱提供的多态性标记的距离和位置可粗 略地对应于物理图谱的平均距离，即 1cM连锁图距对应于1Mb 中国最庞大的下载资料库 • 二、辐射杂交图谱 (radiation hybridization map ,RH) • 概念：辐射杂交图谱是利用体细胞杂交技术构建人类基因组高分辨率、大尺度范围的连续物理 图谱的 常用方法。 该方法以 Goss和 Harris(1975)等人的研究为基础，将体细胞杂交技术与 PCR方法 相结合，利用统计学手段计算染色体位点断裂分离频率，推出位标之间的距离和在染色体上 的排列顺序。 其精度范围约为 ～ 30Mb 中国最庞大的下载资料库 • 构图方法：辐射杂交是利用含有全套鼠染色体和含有某条人类染色体的中国仓鼠体细胞进行杂 交。 含选择性标记单一染色体的体细胞作为供体，利用高剂量的 X射线将候选染色体打断成若干片段，这种染色体结构被破坏的细胞与仓鼠细胞形成杂交克隆。 依据染色体上位标相距越近其断裂频率越低的原理，通过 Southern杂交和 PCR方法研究杂种克隆中人基因组 DNA 位标的分布，用类似于遗传重组原理和最大似然性法 (maximum likelihood)来计算 DNA片段 上多态性和非多态性 STS之间断裂频率，断裂频率越高， STS间的距离越远，以此估计 STS的 实际距离。 根据不同要求，构建断裂程度不同的多套拷贝，建立含有人类 DNA片段的 YA C克隆库，得到分辨率不同的辐射杂交图谱。 中国最庞大的下载资料库 辐射杂交图谱的特点 • ① RH可以使用非多态标记。 • ② RH法与脉冲电场凝胶电泳法 (pulsedfield gel electrophoretic,PFGE)联合使用使两方 法具有互补性。 • ③用 RH法在细胞分裂间期绘制染色体区域图比用细胞遗传学法在细胞分裂中期绘制的染色 体区域图更准确。 • ④由于一些不易建立重叠群的基因组区域 (如某些 GC)富集区较难构建物理图谱，。