免疫细胞化学技术培训讲义(ppt53)-石油化工(编辑修改稿)

免疫细胞化学技术培训讲义(ppt53)-石油化工(编辑修改稿)内容摘要：

从而达到用酶标记抗原抗体反应的效果 优点 : 抗体活性高 灵敏度高 酶－抗酶抗体复合物法 (海量营销管理培训资料下载 ) 常用的标记酶： 1. 辣根过氧化物酶 常用的两种方法是： （ 1）过氧化物酶标记抗体法 （ 2）过氧化物 酶 抗 过氧化物 酶复合物法 （ PeroxidaseAntiperoxidase,PAP） 一抗与组织抗原特异结合 二抗又将 PAP复合物与第一抗体连接在一起 然后加入 HRP的天然底物 H2 O2 和捕捉底物 DAB 光镜 棕黄色反应产物 (组织抗原的定位 ) １ .辣根过氧化物酶 （ hoseradish peroxidase, HRP） (海量营销管理培训资料下载 ) ２ .碱性磷酸酶 （ Alkaline phosphotase, AKP） 碱性磷酸酶技术常用的两种方法： (1)碱性磷酸酶标记抗体 (2)碱性磷酸酶 抗碱性磷酸酶复合物法（ APAAP） （ Alkaline phosphotase－ Antialkaline phosphotase） APAAP法的原理： 以碱性磷酸酶为标记物 ,再通过与其底物的细胞化学反应使抗原抗体反应可见 常用的底物是萘酚 ,偶联剂是固蓝、固红等 常用于标记的酶： 1. 辣根过氧化物酶 (海量营销管理培训资料下载 ) 利用两种物质高度亲和力而互相结合定位特异分子 亲和物质 具有多价能力的物质，与亲和物质有高 度亲和力又能与抗体、蛋白质及各种标 记物 (荧光素、酶、胶体金等 )结合 最常用的亲和物质系统： 生物素 （ biotin）与 亲和素 （ avidin） 两者结合能力为不可逆的 葡萄球菌 A蛋白 与 免疫球蛋白 IgG （三） 亲和细胞化学技术 (海量营销管理培训资料下载 ) (1) 标记亲和素－生物素技术 （ Labeled avidin biotin, LAB） (2) 桥式亲和素－生物素技术 （ Bridged avidin biotin,BAB） (3) 亲和素－生物素 酶复合物技术 （ Avidinbiotin peroxidase plex method， ABC） (海量营销管理培训资料下载 ) 生物素化酶 生物素化抗体 亲和素 — 生物素 — 酶复合物 生物素 亲和素 (海量营销管理培训资料下载 ) 生物素与抗体共价偶联后加入与过氧化物酶（或荧光素）结合的亲和素 利用生物素－亲和素之间的结合，间接显示组织细胞中的抗原 标记亲和素生物素法 (海量营销管理培训资料下载 ) 利用亲和素为桥梁 连接生物素化的抗 体和生物素化的酶 桥式亲和素－生物素法 (海量营销管理培训资料下载 ) 亲和素－生物素 酶复合物技术 亲和素与生物素偶联的过氧化物酶组合成亲和素－生物素－ 酶复合物 ① 特异性抗体（一抗）先与组织细胞中的抗原结合， ② 生物素化抗体（二抗）再与一抗结合 ③ 复合物与生物素化抗体结合 ① → ③ → ② → (海量营销管理培训资料下载 ) 葡萄球菌 A蛋 (Staphylocal protein A, SPA) ◆ 是金黄色葡萄球菌细胞壁含有的一种蛋。