中药化学提取分离和鉴定方法(doc16)-石油化工(编辑修改稿)

中药化学提取分离和鉴定方法(doc16)-石油化工(编辑修改稿)内容摘要：

季铵碱等。 液滴逆流分配法的装置，近年来虽不断在改进，但装置和操作较繁。 目前，对适用于逆流分配法进行分离的成分，可采用两相溶剂逆流连续萃取装置或分配柱层析法进行。 （三）沉淀法：是在中草药提取液中加入某些试剂使产生沉淀，去杂质的方法。 ：铅盐沉淀法为分离某些中草 药成分的经典方法之一。 由于醋酸铅及碱式醋酸 中国最大的管理资源中心 第 7 页 共 15 页 铅在水及醇溶液中，能与多种中草药成分生成难溶的铅盐或络盐沉淀，故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。 中性醋酸铅可与酸性物质或某些酚性物质结合成不溶性铅盐。 因此，常用以沉淀有机酸、氨基酸、蛋白质、粘液质、鞣质、树脂、酸性皂甙、部分黄酮等。 可与碱式醋酸铅产生不溶性铅盐或络合物的范围更广。 通常将中草药的水或醇提取液先加入醋酸铅浓溶液，静置后滤出沉淀，并将沉淀洗液并入滤液，于滤液中加碱式醋酸铅饱和溶液至不发生沉淀为止，这样就可得到醋酸铅沉淀物、碱式醋酸铅沉淀物及母液三部分。 然后将铅盐沉淀悬浮于新溶剂中，通以硫化氢气体，使分解并转为不溶性硫化铅而沉淀。 含铅盐母液亦须先如法脱铅处理，再浓缩精制。 硫化氢脱铅比较彻底，但溶液中可能存有多余的硫化氢，必须先通人空气或二氧化碳让气泡带出多余的硫化氢气体，以免在处理溶液时参与化学反应。 新生态的硫化铅多为胶体沉淀，能吸咐药液中的有效成分，要注意用溶剂处理收回。 脱铅方法，也可用硫酸、磷酸、硫酸钠、磷酸钠等除铅，但硫酸铅、磷酸铅在水中仍有一定的溶解度，除铅不彻底。 用阳离子交换树脂脱铅快而彻底，但要注意药液中某些有效成分也可能被交换上去，同 时脱铅树脂再生也较困难。 还应注意脱铅后溶液酸度增加，有时需中和后再处理溶液，有时可用新制备的氢氧化铅、氢氧化铝、氢氧化铜或碳酸铅、明矾等代替醋酸铅、碱式醋酸铅。 例如在黄芩水煎液中加入明矾溶液，黄芩甙就与铝盐络合生成难溶于水的络化物而与杂质分离，这种络化物经用水洗净就可直接供药用。 ：例如在生物碱盐的溶液中，加入某些生物碱沉淀试剂（见生物碱性质下），则生物碱生成不溶性复盐而析出。 水溶性生物碱难以用萃取法提取分出，常加入雷氏铵盐使生成生物碱雷氏盐沉淀析出。 又如橙皮甙、芦丁、黄芩甙、甘草皂甙均 易溶于碱性溶液，当加入酸后可使之沉淀析出。 某些蛋白质溶液，可以变更溶液的 pH 值利用其在等电点时溶解度最小的性质而使之沉淀析出。 此外，还可以用明胶、蛋白溶液沉淀鞣质；胆甾醇也常用以沉淀洋地黄皂甙等。 可根据中草药有效成分和杂质的性质，适当选用。 （四）盐析法：盐析法是在中草药的水提液中、加入无机盐至一定浓度，或达到饱和状态，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而与水溶性大的杂质分离。 常用作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。 例如三七的水提取液中加硫酸镁至饱和状态，三七皂甙乙即可沉淀析出，自 黄藤中提取掌叶防己碱，自三颗针中提取小檗碱在生产上都是用氯化钠或硫酸按盐析制备。 有些成分如原白头翁素、麻黄碱、苦参碱等水溶性较大，在提取时，亦往往先在水提取液中加入一定量的食盐，再用有机溶剂萃取。 （五）透析法：透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜，而大分子物质不能通过半透膜的性质，达到分离的方法。 例如分离和纯化皂甙、蛋白质、多肽、多糖等物质时，可用透析 中国最大的管理资源中心 第 8 页 共 15 页 法以除去无机盐、单糖、双糖等杂质。 反之也可将大分子的杂质留在半透膜内，而将小分子的物质通过半透膜进入膜外溶液中，而加以分离精制：透析是否成功与透 析膜的规格关系极大。 透析膜的膜孔有大有小，要根据欲分离成分的具体情况而选择。 透析膜有动物性膜、火棉胶膜、羊皮纸膜（硫酸纸膜）、蛋白质胶膜、玻璃纸膜等。 油常多用市售的玻璃纸或动物性半透膜扎成袋状，外面用尼龙网袋加以保护，小心加入欲透析的样品溶液，悬挂在清水容器中。 经常更换清水使透析膜内外溶液的浓度差加大，必要时适当加热，并加以搅拌，以利透析速度加快。 为了加快透析速度，还可应用电透析法，即在半在半透膜旁边纯溶剂两端 放置二个电极，接通电路，则透析膜中的带有正电荷的成分如无机阳离子、生物碱等向阴极移动，而带 负电共荷的成分如无机阴离子、有机酸等则向阳极移动，中性化合物及高分子化合物则留在透析膜中。 透析是否完全，须取透析膜内溶液进行定性反应检查。 一般透析膜可以自制：动物半透膜如猪、牛的膀胱膜、用水洗净，再以乙醚脱脂，即可供用；羊皮纸膜可将滤纸浸入 50％的硫酸 15～ 60 分钟，取出铺在板上，以水冲洗制得。 其膜孔大小与硫酸浓度、浸泡时间以及用水冲洗速度有关；火棉胶膜系将火棉胶溶于乙醚及无水乙醇，涂在板上，干后放置水中即可供用，其膜孔大小与溶剂种类、溶剂挥发速度有关，溶剂中加入适量水可使膜孔增大，加入少量醋酸可 使膜孔缩小；蛋白质胶（明胶）膜可用 20％明胶涂于细布上，阴干后放水中，再加甲醛使膜凝固，冲洗干净即可供用。 近来商品有透析膜管成品出售，国外习称“ ViskingDialysisTubing”，有各种大小厚度规格，可供不同大小分子量的多糖、多肽透析时选用。 （六）结晶、重结晶和分步结晶法：鉴定中草药化学成分，研究其化学结构，必须首先将中草药成分制备成单体纯品。 在常温下，物质本身性质是液体的化台物，可分别用分馏法或层析法进行分离精制。 一般他说，中草药化学成分在常温下多半是固体的物质，都具有结晶他的通性，可以 根据溶解度的不同用结晶法来达到分离精制的目的。 研究中草药化学成分时，一旦获得结晶，就能有效地进一步精制成为单体纯品。 纯化台物的结晶有一定的熔点和结晶学的特征，有利于鉴定。 如果鉴定的物质不是单体纯品，不但不能得出正确的结论，还会造成工作上的浪费。 因此，求得结晶并制备成单体纯品，就成为鉴定中草药成分、研究其分子结构重要的一步。 1．杂质的除去：中草药经过提取分离所得到的成分，大多仍然含有杂质，或者是混合成分。 有时即使有少量或微量杂质存在，也能阻碍或延缓结晶的形成。 所以在制备结晶时，必须注意杂质的干扰，应力 求尽可能除去。 有时可选用溶剂溶出杂质，或只溶出所需要的成分。 有时可用少量活性炭等进行脱色处理，以除去有色杂质。 有时可通过氧化铝，硅胶或硅藻土短柱处理后，再进行制备结晶。 但应用吸附剂除去杂质时，要注意所需要的成分也可能被吸附而损失。 此外，层 中国最大的管理资源中心 第 9 页 共 15 页 析法更是分离制备单体纯品所常用的有效方法。 如果一再处理仍未能使近于纯品的成分结晶化，则可先制备其晶态的衍生物，再回收原物，可望得到结晶。 例如游离生物碱可制备各种生物碱盐类，羟基化合物可转变成乙酸化物，碳基化台物可制备成苯踪衍生物结晶。 美登碱在原料中含量少，且反复分离 精制难以得到结晶，但制备成 3 一滇丙基美登碱结晶后，再经水解除去澳丙基，美登碱就能制备成为结晶。 2．溶剂的选择；制备结晶，要注意选择合宜的溶剂和应用适量的溶剂。 合宜的溶剂，最好是在冷时对所需要的成分溶解度较小，而热时溶解度较大。 溶剂的沸点亦不宜太高。 一般常用甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙醋等。 但有些化合物在一般溶剂中不易形成结晶，而在某些溶剂中则易于形成结晶。 例如葛根素、逆没食子酸（ ellagicacid）在冰醋酸中易形成结晶，大黄素（ emodin）在吡啶中易于结晶，萱草毒素（ hemerocallin）在 N， N 一二甲基甲酞胺（ DMF）中易得到结晶，而穿心莲亚硫酸氢钠加成物在丙酮一水中较易得到结晶。 又如蝙蝠葛碱通常为无定形粉未，但能和氯仿或乙醚形成为加成物结晶。 3．结晶溶液的制备：制备结晶的溶液，需要成为过饱和的溶液。 一般是应用适量的溶剂在加温的情况下，将化合物溶解再放置冷处。 如果在室温中可以析出结晶，就不一定放置于冰箱中，以免伴随结晶析出更多的杂质。 “新生态”的物质即新游离的物质或无定形的粉未状物质，远较晶体物质的溶解度大，易于形成过饱和溶液。 一般经过精制的化合物，在蒸去溶剂抽松为无定形 粉未时就是如此，有时只要加入少量溶剂，往往立即可以溶解，稍稍放置即能析出结晶。 例如长春花总弱碱部分抽松后加入 1． 5倍量的甲醇溶解，放置后很诀析出长春碱结晶。 又如蝙蝠葛碱在乙醚中很难溶解，但当其盐的水溶液用氨液碱化，并立即用乙醚萃取，所得的乙醚溶液，放置后即可析出蝙蝠葛碱的乙醚加成物结晶。 制备结晶溶液，除选用单一溶剂外，也常采用混合溶剂。 一般是先将化合物溶于易溶的溶剂。