中医院临床微生物室标准操作程序sop(doc40)-医药保健(编辑修改稿)

中医院临床微生物室标准操作程序sop(doc40)-医药保健(编辑修改稿)内容摘要：

编号： WSWSOP15 日期： 05 年 9 月 5 日 版号： 2020— 1 第 1 页，共 2 页 【 目的 】 明确普通 G+、 G MicroScan 板接种培养流程，指导检测人员正确进行普通 G+、 G MicroScan 板接种培养的操作流程。 【 适用人员 】 临床微生物实验室检验人员 【 该 SOP变动程序 】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本 SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【 步骤 】 标本按微生物室标准操作程序所推荐的方法进行收集、运送和初步离培养。 染色：挑取纯培养细菌进行革兰氏染色 1) 革兰氏阴性杆菌、弧菌：进行氧化酶实验，记下实验结果，选用阴性板 NC21 2) 革兰氏阳性球菌：进行触酶实验，区分链球菌科（ ）和微球菌科（ +），记下实验结果，选用阳性板 PC12 接种： ① .接种的准备： a) 用取种针去接触纯菌落 4 次，让顶端凹槽填满菌，用 CAP 帽子抹去多余菌，放接种水 中盖紧，充分混匀，备用。 b) 挑选琼脂平板上，形态相同的菌落移种于 MH 液体培养基中，置 350C温箱中孵育 4小时，用生理盐水稀释至相当于 麦氏浊度标准，或用接中环挑取菌落，悬浮于生理盐水中振荡混匀后与标准化浊管比浊，调整浊度至相当于 麦氏浊度标准，吸 100ul 菌悬液于 25ml 接种水中，备用 ； ② . Microscan 板的水化与接种： 要用的干板取出室温平衡后，用无菌吸嘴吸取 115ul 菌悬液于相应的Microscan 板中。 加石蜡油：于孔下划有一横线的孔滴加 3滴石蜡油。 阴性板 NC21： 7个孔（ GLU URE LYS H2S ARG ORN DCB） 阳性板 PC12： 2个孔（ URE ARG） 贴封口胶纸：对革兰氏阴性板，氧化酶（ +）的板右上角 9 个孔贴封口胶（空 位为 DCB 孔） CIT TAR OF/G MAL ACE OF/B ONPG CET DCB 孵育：测试板上盖一块空板， 35℃非 CO2培养箱孵育 1624 小时。 检查：从培养箱取出板 ①检查 C 孔 （ 控制 孔） 须澄 清； G 孔 （生 长孔 ）混 浊， 有菌 长。 （如不满足上述条件，则不要判药敏结果） ②革兰氏阳性板： a PGT 孔（ +）黄色 b 以下 9孔，有任意三个以上为（ +）黄色 RAF LAC TRE MNS SOR ARA RBS INC MAN ★以上两个条件，任意一个符合即可加试剂叛读结果。 若以上两个条件均不符合， 则需再孵育 1524 小时。 药敏 MIC 结果需在 1624小时内判读。 ③革兰氏阴性板： a 葡萄糖发酵菌： 1） GLU=深黄色 2） SUC=黄色或 SOR=黄色 b 葡萄糖非发酵菌： 1） ARG=紫色和 OF/G=黄色 3） LYS=紫色 2） ARG=紫色和 CET=混浊 4） ORN=紫色 ★符合以上条件之一则可加试剂叛读结果。 若不符合，则需再孵育 1524小时。 药敏 MIC 结果需在 1624 小时内判读。 加试剂： 革兰氏阴性板： VP40%KOH(VP1)， 5%α 萘酚（ NIT2）各一滴。 %对氨基苯磺酸（ NIT1）， %α 萘酚（ NIT2）各一滴。 （ 5分钟后判读）。 TDA10%Fec13(TDA)一滴。 IND柯凡奇试剂（ IND） 3滴。 革兰氏阳性板： VP40%KOH(VP1), 5%α 萘酚（ VP2）各一滴。 %对氨基苯磺酸（ NIT1）， %α 萘酚（ NIT2）各一滴。 （ 5分钟后判读。 ） PYR肽酶试剂（ PET） 2 滴。 ★如果 VP（ ）须等到 20分钟后再确定 VP 是否真为阴性 拿掉封口剂。 人工判读 ,将生化反应和药敏结果记录在相应的 Microscan 结果记录纸上。 编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 2020 年 9 月 5 日 遂昌中医院 临床微生物实验室 判读普通革兰阳性板 标准操作程序 编号： WSWSOP16 日期： 05 年 9 月 5 日 版号： 2020— 1 第 1 页，共 2 页 【 目的 】 指导检测人员正确进行普通革兰阳性（ G+MicroScan）板 的结果判读，保证检验 结果。 【 适用人员 】 临床微生物实验室检验人员 【 该 SOP变动程序 】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本 SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【 普通 G+MicroScan 板阳性对照色卡 】 VP VP2 各一滴 20分钟 微球菌编码 链球菌编码 NIT NIT2 各一滴 5分钟 PEP 二滴 2分钟 【 步骤 】 一、 35℃非 CO2培养箱孵育 1624 小时后， C 孔（控制孔）须澄清； G 孔（生长孔）混浊，有菌长 ,并符合以下条件之一则可加试剂判读结果： a PGT 孔（ +） 黄色有沉淀 b 以下 9孔，有任意三个以上为（ +） 黄色 RAF LAC TRE MNS SOR ARA RBS INC MAN 二、以上两个条件均不符，则先判读所有药敏结果。 记录鉴定药敏或生长试验CV、 MS、 NOV、 NaCL、 BAC 和 IDX、 PHO、 BL 实验结果，其它生化反应试验再孵育 1524 小时后判读。 三、普通 G+MicroScan 板生化结果判断： 试验孔名称 阳性结果 阴性结果 CV MS NaCL 有生长（混浊） 无生长（清） OPT NOV BAC PGR PHO PGT 黄色（孔中有一点黄色即可） 无色 （与 NOV 作对照 ) 试验孔名称 阳性结果 阴性结果 IDX 蓝色，灰色沉淀 无色或白色沉淀 VP 粉红至红色 无色至褐色或极淡粉色 试验孔名称 阳性结果 阴性结果 BE 暗棕色至黑色 无色至亮棕色 PYR 红色或橙红色 黄色至橙色 ARG 微球菌属 橙色，粉红 /红色 黄色至橙黄色 4 CV NOV VP BE PGT LAC NaCL PBS BAC 2 MS PGR OPT PYR URE TRE SOR INU PRV 1 NIT IDX PHO ARG MAN MNS ARA RAF HEM 链球菌属 粉红 /红色 黄色至橙色 URE 粉红色（ 24H） 黄 色至橙色 RAF LAC SOR RBS INU 黄色 橙色至红色 PRV TRE ARA MNS MAV BL 无色 兰色至黑色 NIT 粉红至红色 无色或淡粉色 HEM β 溶血 无β 溶血 LOC 仪器识别反应板类型用 四、 MIC 药敏结果的判读： 1. 所有的药敏， CV、 MS、 NOV、 NaCL、 OPT 和 BAC的结果以黑色为背景判读； 2. 以最开始出现生长抑制的最低浓度孔记录为 MIC； 3. 当所有孔均不出现细菌生长， MIC 记录为小于等于最低浓度； 4. 当所有孔均出现细菌生长 ,MIC 记录为大于 最高浓度； 5. 当不出现细菌生长的浓度孔出现于细菌生长的浓度孔梯度孔中，譬如，细菌在 和 8ug/ml 浓度孔中生长，但在 4ug/ml 孔中不生长，此孔则称为跳孔，这个浓度孔结果应被忽略。 五、生化和药敏结果均记录在手工记录纸上： Microscan 阳性复合板 PC12 结果记录： 病人： 床号： 记录时间： 鉴定结果： 4 CV NOV VP BE PGT LAC NaCL PBS BAC 2 MS PGR OPT PYR URE TRE SOR INU PRV 1 NIT IDX PHO ARG MAN MNS ARA RAF HEM 鉴定值 药敏结果： T/S Rif Ox Aug Te Imp Am P Cf Va E Cla Cfz Cd Gm Cft Cp Nxn Fd TFG STS GMS β Lac 编 写 人 批 准 人 生 效 日 期 傅石明 2020 年 9 月 5 日 遂昌中医院 临床微生物实验室 判读普通革兰阴性板 标准操作程序 编号： WSWSOP17 日期： 05 年 9 月 5 日 版号： 2020— 1 第 1 页，共 2 页 【 目的 】 指导检测人员正确进行普通革兰阴性（ GMicroScan）板的结果判读，保证检验 结果。 【 适用人员 】 临床微生物实验室检验人员 【 该 SOP变动程序 】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本 SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【 普通 GMicroScan 板阳性对照色卡 】 葡萄糖发酵菌编码 TDA 一滴 3分钟 NIT NIT2 各一滴 5 分钟 4 GLU RAF INO URE LYS TDA CIT CL4 TAR OF/G CL4 NIT 2 SUC RHA ADO H2S ARG ESC MAL CF8 ACE P4 Fd64 OXI 1 SOR ARA MEL IND ORN VP ONPG OXI CET K4 To4 葡萄糖非发酵菌编码 IND三滴 5分钟 VP VP2 各一滴 20 分钟 【 步骤 】 一、 35℃非 CO2培养箱孵育 1624 小时后， C 孔（控制孔）须澄清； G 孔（生长孔）混浊，有菌长 ,并符合 以下条件之一则可加试剂叛读结果： 葡萄糖发酵菌： 1） GLU=深黄色 2） SUC=黄色 或 SOR=黄色 葡萄糖非发酵菌： 1） ARG=紫色 和 OF/G=黄色 3） LYS=紫色 2） ARG=紫色 和 CET=混浊 4） ORN=紫色 二、以上条件均不符，则先判读所有药敏结果。 记录鉴定药敏 CL Cf PK FD64 和 CET 实验结果，其它生化反应试验再孵育 1524小时后判读。 三、普通 GMicroScan 板生化结果判断： 试验孔名称 阳性结果 阴性结果 GLU 深黄色 橙红色 SUC RAF INO SOR 黄色、橙黄色 红色 RHA ADO ARA MEL URE 洋红、粉红色 黄、橙黄或淡粉红色 H2S 黑色有沉淀 没变黑 IND 粉红至红色 澄清、橙色 LYS ORN ARG 发酵菌 紫色至灰色 黄色 （ DCB 为对照孔）非发酵菌 紫色 无色或灰色 试验孔名称 阳性结果 阴性结果 TDA 暗棕色 黄色至橙色 ESC 棕色至黑色 澄清 VP 红色 澄清 ONPG 浅黄色 澄清 CIT TAR MAL ACE 蓝色至蓝绿色 绿色至黄色 OF/G 若 OF/B 为绿色 黄色 绿色至蓝色 若 OF/B 为蓝色或蓝绿色 黄色至绿色 蓝色 NIT 红色 无色或淡粉色 P4 K4 CL4 Cf8 CET 有生长（混浊） 无生长（清） LOC 仪器识别反应板类型用 四、 MIC 药敏结果的判读： 6. 所有的药敏， CV、 MS、 NOV、 NaCL、 OPT 和 BAC的结果以黑色为背景判读； 7. 以最开始出现生长抑制的最低浓度孔记录为 MIC； 8. 当所有孔均不出现细菌生长， MIC 记录为小于等。