临床基因扩增检验的质量保证ppt97-质量检验(编辑修改稿)

临床基因扩增检验的质量保证ppt97-质量检验(编辑修改稿)内容摘要：

理想的试剂和操作方法  试剂盒的质检  定量测定的精密度是测定组成步骤的变异和的平方根 (SD)= 上式中 SDa、 SDb、 SDc是步骤 a、 b、 c等（例如试剂准备、标本采集、核酸提取、扩增和产物检测等）的标准差 ； SD SD SDa b c2 2 2   . . . . . .来自 理想的试剂和操作方法 改善测定精密度的措施必须首先着重在最不精密的步骤上，应对试剂准备、标本收集、核酸提取、测定方法和仪器操作写出 “ 标准操作程序 ” (SOP) 来自 实验室质量管理体系的建立 质量手册 质量体系程序文件 标准操作程序 来自 质量管理的内涵 写你所做的 做你所写的 记录你已做的 来自 怎样编写 SOP。 来自 人员培训  临床基因扩增检验的操作主要是标本处理中的核酸提取步骤， 这其中所涉及 的又主要是加样器的使用，尽管操作简单， 但由于均为微量操作，要获得稳定可靠的测定结果，操作人员需要一定的专业技术知识和经验，要尽可能做到知其然 又知其所以然。 来自 核酸样本的制备、扩增检测 及其质量控制  一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理  核酸的分离纯化  靶核酸提取的质量  临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质  核酸样本制备及扩增检测的质控  产物检测的质控 来自 一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理  靶核酸可以与宿主细胞整合，核内游离及胞浆内各种构形存在于细胞内，如测定的是病原微生物 ,则靶核酸存在于细菌、病毒、原虫或真菌细胞内，如果上述细胞破裂 ,则靶核酸亦可存在于细胞外。  一般均使用去垢剂 (如 Triton100)裂解细胞，用一种蛋白裂解酶 (如蛋白酶 K)消化结合于核酸的蛋白质，从而将靶核酸从细胞内释放出来。 来自 核酸的分离纯化 核酸的分离纯化就是要将蛋白、脂类等干扰核酸扩增的物质去除。 经典方法 硅吸附法 对于商品核酸提取试剂盒，临床实验室在使用前，必须对其核酸提取纯度和效率进行评价。 来自 临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质  临床标本中： 血清或血浆中的血红素及其代谢产物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份 、 降解靶核酸的核酸 酶等。  核酸提取中： 许多试剂如乙二胺四乙酸 (EDTA)、去垢剂如十二烷基硫酸盐(SDS)和 chaotrope试剂如异硫氰酸胍和盐酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有机溶剂。 来自 对临床标本中可能存在的 抑制 /干扰物的质控措施 质控措施： 采用内质控（ internal control, IC）（通常称为内标）的方法 内标有两种 ,即竞争性的和非竞争性的内标。 内标设置的必要性。 来自 统计学质量控制 理想的室内质控样本的条件 测定中质控样本的设置、数量及排列顺序 统计学质控的特点 统计质控方法 来自 理想的室内质控样本的条件  基质与待测样本一致；  所含待测物浓度接近试验的决定性水平；  稳定；  靶值或预期结果已定；  无已知的生物传染危险性；  单批可大量获得；  价廉 来自 测定中质控样本的设置、数量及排列顺序  每次检测究竟使用几个质控样本并排在临床标本中的哪个位置最为适宜。 从理论上说，为最大可能地检出实验的随机和系统误差，应每隔几份临床标本插入 1份质控样本，但考虑国内目前的实际情况及成本效益，一般来说，如果临床基因扩增检验的标本量不是特别大，定性测定有一份接近 cutoff的弱阳性和一份阴性质控样本应可以满足要求。 而定量测定则要根据试验的测定范围，采用高、中、低三种浓度的质控样本。 至于在测定中的排列顺序，可排于标准品或校准品之后，临床样本之前。 来自 临床基因扩增检验室内质控的独特性 即监测污染发生的阴性质控的设置。 应该包括 1份 阴性原血清样本 、1份在标本核酸提取过程中带入的 一个空管 和 仅含扩增反应混合液的管。 来自 阴性原血清质控样本的功能 监测实验室的以前扩增产物的污染； 由实验操作所致的标本间的交叉污染 ； 扩增反应试剂的污染。 来自 在标本核酸提取过程中带入的一个空管 的功能 基本功能与阴性原血清质控样本相同，但不同的是，其基质为水，不含阴性原血清质控样本中可能有的扩增抑制物，因而对污染的反映更为灵敏 ； 不能取代原血清阴性样本。 来自 仅含扩增反应混合液的管 的功能  监测扩增试剂是否发生污染，具有较强的污染鉴别性。  如想鉴别实验室是否发生污染，可将一个或多个空管打开静置于标本制备区 30～ 60分钟，然后加入扩增反应混合液同时以水替代核酸样本扩增，如为阳性，而上述仅含扩增反应混合液的管为阴性，则说明实验室以前扩增产物的存在。 来自 统计学质控的特点  检验误差有两类，一是系统误差，一是随机误差。  系统误差通常表现为质控物测定均值的漂移，是由操作者所使用的仪器设备、试剂、标准品或校准物出现问题而造成的，这种误差可以通过前述的措施方法加以控制，是可以排除的。  随机误差则表现为测定 SD的增大，主要是由实验操作人员的操作等随机因素所致，其出现难以完全避免和控制。 来自 统计学质控的功能  统计学质控的功能就是发现误差的产生及分析误差产生的原因，采取措施予以避免。  开展统计质量控制前，应将可以控制的误差产生因素尽可能地加以控制，这不但是做好室内质控的前提，也是保证常规检验工作质量的先决条件。 来自 统计质控方法  基线测定  质控规则的表达方式及定义  LeveyJennings质控图方法  LeveyJennings质控图结合 Westgard多规则质控方法  累积和 (CUSUM) 质控方法  “ 即刻法 ” 质控方法 来自 基线测定  最佳条件下的变异（ Optimal conditions。