巨浪果汁饮品公司实验室质量工作手册(33页)-质量手册(编辑修改稿)

巨浪果汁饮品公司实验室质量工作手册(33页)-质量手册(编辑修改稿)内容摘要：

亚硫酸钠培养基： 称取 39g营养琼脂， 、 5g无水亚硫酸钠，加 20ml5%碱性品红乙醇溶液， 1000ml蒸馏水，加热溶解，于高压蒸气灭菌器内，经 压力下灭菌 20min， 倒入ф 15mm 平皿内 20～ 30ml 摇匀，冷后放入冰箱保存。  乳糖蛋白胨培养液 称取 10g蛋白胨、 3g牛肉膏、 5g乳糖、 5gNaCl，加 1000ml蒸馏水加热溶解，调整 pH=～， %溴甲酚紫乙醇溶液，混匀后分装于装有导管的ф 15mm 试管中，灭菌备用。 2)步骤  以无菌操作将检样 10ml 放于含有 90ml 灭菌生理盐水稀释液的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠 )，经充分振摇成 1:10 的均匀稀释液。  滤器用点燃的酒精棉球火焰灭菌。  以无菌操作方式用无菌摄子夹取灭菌滤膜边缘部分，贴放在灭菌的滤床上，固 定好滤器，将试样注入滤器中，真空泵抽滤。  抽滤完毕，关上滤器阀门，取下滤器用灭菌摄子夹取滤膜边缘部分移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，不留气泡，将平皿倒置，在 37℃恒温箱内培养 24h。 3)计算： 挑选符合下列特征菌落进行革兰氏染色镜检。 紫红色，具有金属光泽的菌落。 深红色，不带或略带金属光泽的菌落。 淡红色，中心色较深的菌落。 凡系革氏染色阴性无芽胞杆菌，再接种乳糖蛋白胨培养液，经 37℃培养产酸产气者，则养定为大肠菌群阳性。 100mL试样中总大肠菌群数等于滤膜 上生长的大肠菌群菌落总数乘以 10。 大肠菌群最可能数 (MPN) 检索表 阳性管数 MPN 100ml(g) 95%可信限 1ml(g) 3 (g) 3 (g) 3 下限 上限 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 2 3 〈 30 30 60 90 〈 5 90 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1 2 3 30 60 90 120 〈 5 130 0 0 0 2 2 2 0 1 2 60 90 120 0 2 3 160 0 0 0 0 3 3 3 3 0 1 2 3 90 130 160 190 1 1 1 1 0 0 0 0 0 1 2 3 40 70 110 150 〈 5 10 200 210 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 2 3 70 110 150 190 10 30 230 360 1 1 1 1 2 2 2 2 0 1 2 3 110 150 200 240 30 360 1 1 1 1 3 3 3 3 0 1 2 3 160 200 240 290 续表 阳性管数 MPN 100ml(g) 95%可信限 1ml(g) 3 (g) 3 (g) 3 下限 上限 2 2 2 2 0 0 0 0 0 1 2 3 90 140 200 260 10 30 360 370 2 2 2 2 1 1 1 1 0 1 2 3 150 200 270 340 30 70 440 890 2 2 2 2 2 2 2 2 0 1 2 3 210 280 350 420 40 100 470 1500 2 2 2 2 3 3 3 3 0 1 2 3 290 360 440 530 3 3 3 3 0 0 0 0 0 1 2 3 230 390 640 950 40 70 150 1200 1300 3800 3 3 3 3 1 1 1 1 0 1 2 3 430 750 1200 1600 70 140 300 2100 2300 3800 3 3 3 3 2 2 2 2 0 1 2 3 930 1500 2100 2900 150 300 350 3800 4400 4700 3 3 3 3 3 3 3 3 0 1 2 3 2400 4600 11000 ≥ 24000 360 710 1500 13000 24000 48000 注：①本表采用 3 个稀释度〔 1ml(g)、 (g)和 (g)〕，每稀释度 3 管。 ②表内所列检样量如改用 10ml(g)、 1ml(g)和 (g)时，表内数字应相应降低 10 倍；如改用 (g) 、 (g) 和 (g)时，则表内数字应相应增加 10倍。 其余可类推。 霉菌和酵母计数检验方法（倾注法） (1) 设备和材料 同细菌总数 (2)培养基和试剂 虎红培养基或马铃薯葡萄糖琼脂或 高盐察氏琼脂 (3)检样稀释及培养：  以无菌操作将检样 10ml 放入 90ml 灭菌生理盐水的带玻塞锥形瓶中 ,摇匀 ,做成 1:10 稀释液。  吸取 1:10 稀释液 1ml，注入含有 9ml 灭菌生理盐水的试管中。 （注意吸管尖端不要触及试管内稀释液），混合均匀，作成 1:100 的稀释液。  按上项操作顺序作 10 倍 递增稀释液，每递增稀释一次，即换用一支吸管。  分别吸取 1ml 稀释液于灭菌平皿中，每个 稀释度作两个平皿。  稀释液移入平皿后，应立即将凉至 45℃左右的培养基约 15ml 注入平皿中，并转动平皿使混合均匀。  待琼脂凝固后，翻转平板， 置 25℃～ 28℃恒温箱中， 3 天后开始观察，共培养观察 5 天。 (2)菌落计数方法。 做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查以防遗漏。 在记下各平板的菌落数后，求出同一稀释度各平板的平均菌落数。 (3)霉菌和酵母计数的报告。 选取菌落数在 10～ 150之间的平板。 应采用两个平板的平均数乘以稀释倍数，即为每毫升检样中所含霉菌和酵母计数，以个 /ml 表示。 耐热菌 ATB KIRIN 氏检验计数法 (1)凯氏培养基 在一个小瓶中放入以下成分： 蒸馏水 900ml 酵母浸膏 蛋白胨 5g 琼脂 15g 葡萄糖 1g TWEEN80 1g 在 121℃下灭菌 15 分钟，然后放在 46℃水浴锅中。 将 100ml 蒸馏水和苹果 酸 混匀 ,121℃下灭菌 15分钟。 将苹果酸加入凯氏培养基中混匀。 将酸化培养基倒入 平皿中使其凝固。 (2)方法： 将 10ml 浓缩果汁加入 90ml 无菌水中； 80℃处理 13min，不断摇晃（温度 80℃计时）；冷却样品；用 m 过滤膜真空过滤样品；移去膜上漏斗；用无菌镊子将膜转移到盛有凯氏培养基的培养皿中；轻轻地、 在膜上扎孔以保持膜与培养基接触。 在 40℃培养 4天；在膜上读出菌落数，计算每 10g 产品细菌数。 空气微生物测定方法 (1) 仪器 无菌操作台、灭菌培养皿、蒸汽杀菌锅 (2) 培养基 营养琼脂、察氏琼脂 (3)步骤  依营养琼脂、察氏琼脂配制方法，配制培养基， 121℃， 15 分钟灭菌。  将培养基置于 46℃恒温水浴中。  营养琼脂，察氏琼脂各做两个培养皿，并盖上盖子。  将平板培养皿放在车间适宜位置，打开盖，静置三分钟后盖上盖子。  营养琼脂培养皿，用于测细菌总数， 36177。 1℃培养 48 小时后计数。 察氏琼脂培养皿，用于测 霉菌酵母， 25～ 28℃， 5天后计数。 致病菌 志贺氏菌检验 金黄色葡萄球菌检验 四、 标准溶液的配制与标定 １、氢氧化钠标准溶液 ： C（ NaOH） =（ 1）配制：称取 100g 氢氧化钠，溶于 100ml 水中，摇匀，注入聚乙稀容器中，密闭放置至溶液清亮。 用塑料管虹吸 5ml 上清氢氧化钠饱和溶液。 注入 1000ml 无二氧化碳水中，摇匀。 （ 2） 标定：称取 基准邻苯二甲酸氢钾于 105～ 110℃烘至恒重，称准至 ，溶于 50ml 无 二氧化碳的水中，加 2 滴酚酞指示液 (10g/l)，用配制好的氢氧化钠溶液滴定至溶液呈粉红色，同时作空白试验。 （ 3）计算：氢氧化钠标准溶液浓度 C（ NaOH）＝ m/(V1V2) 式中： C（ NaOH） —— 氢氧化钠标准溶液三物质的量浓度， mol/l m—— 邻苯二甲酸氢钾之质量， g V1—— 氢氧化钠溶液之用量， ml V2—— 空白试验氢氧化钠溶液之用量， ml —— 与 ２、重铬酸钾标准溶液： （ 1）配制：称取 5g 重铬酸钾，溶于 1000ml 水中，摇匀。 （ 2）标定：量取 ～ 配制好的重铬酸钾溶液 [1/6K2Cr2O7]，置于碘量瓶中，加 2g碘化钾及 20ml 硫酸溶液 (20%)，摇匀，于暗处放置 10min，加 150ml 水，用硫 代硫酸钠标准溶液 [C(1/6K2Cr2O7)=]滴定，近终点时加 3ml 淀粉指示液（ 5g/l），继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿色。 同时，作空白试验。 （ 3） 计算：重铬酸钾标准溶液浓度： C(1/6K2Cr2O7)＝（ V1V2） C/ V 式中： C(1/6K2Cr2O7)—— 重铬酸钾标准溶液之物质的量浓度， mol/l V1—— 硫代硫酸钠标准溶液之用量， ml V2—— 空白硫代硫酸钠标准溶液之用量浓度， mol/l C1—— 硫代硫酸钠标准溶液之物质的量浓度， mol/l V—— 重铬酸钾溶液之用量， ml ３、硫代硫酸钠标准溶液： C(Na2S2O3)=(1)配制：称取 26g 硫代硫酸钠（ Na2S2O3 5H2O）（或 16g 无水硫代硫酸钠），溶于 1000ml 水中，缓缓煮沸 10min，冷却，放置两周后过滤备用。 (2)标定：称取 于 120℃烘至恒重的基准重铬酸钾，称准至。 置于碘量瓶中，溶于 25ml水，加 2g 碘化钾及 20ml 硫酸溶液 (20%)，摇匀，于暗处放置 10min，加 150ml 水，用配制好的硫代硫酸钠标准溶液 [C(Na2S2O3)=]滴定，近终点时加 3ml 淀粉指示液（ 5g/l），继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿色。 同时，作空白试验。 (3)计算：硫代硫酸钠标准 溶液浓度： C(Na2S2O3)＝ m/*（ V1V2） 式中： C(Na2S2O3)—— 硫代硫酸钠标准溶液之物质的量浓度， mol/l m—— 重铬酸钾溶液之质量， g V1—— 硫代硫酸钠标准溶液之用量， ml V2—— 空白试验硫代硫酸钠标准溶液之用量， ml。