食品安全现代生物检测技术(编辑修改稿)

食品安全现代生物检测技术(编辑修改稿)内容摘要：

• 特异性高，获得结果快，仪器简单，易于操作，对人员要求不高。 免却了对样品进行核酸提取的麻烦，同时可降低检测的成本，由于酶既有很高的催化效率，可极大的放大反应效果，从而使测定达到很高的灵敏度和稳定性。 • (二） PCR技术与转基因食品的检测 • • （ 1） PCR基本原理 PCR技术由美国 Centus公司Kary Mullis发明， 20世纪 90年代逐渐成熟应用。 简单地说 PcR就是利用核酸 DNA聚合酶、引物和4种脱氧单核苷酸在试管内完成模板 DNA的快速复制． • （ 2） PCR技术检测转基因食品的技术关键和理论依据 • （ 3） PCR检测转基因食品的基本步骤 • ①待检材料 DNA提取：通常利用 CTAB法从食品材料中提取核酸； • ② PCR反应：设计合适引物。 PCR扩增待检样品中的靶标 DNA； • ③观测 PCR产物：通过凝胶电泳分析将PCR产物展现； • ④确定结果：有时为了避免假阻性，还需要对 PCR产物进行限制性酶切分析进行质量控制。 • • 目前基于 GMO特异 DNA片段的定性 PCR筛选方法已广泛应用于 GMO食品检测．但是随着各国有关 GMO标签法的建立和不断完善，对食品中的 GMO含量的下限已有所规定。 为此，研究者在定性筛选 PCR方法的基础上发展了不同的定量 GMO的 PCR检测方法。 目前，国外较为成熟的方法主要有半定量 PCR法、定量竞争PCR(Quantitative petitive PCR)和 Real—time PCR(实时定量 PCR)法等三种。 • （ 1）半定量 PCR法 • ①样品 DNA的提取和定量。 • 按常规方法提取 DNA后，取部分样品 DNA在 ％琼脂糖凝胶中电泳，与已知古量的 Marker比较，用计算机凝腔成像分析系统处理结果，以确定所提取的 DNA量。 例如，一般700mg的玉米粉可提取 lμg DNA。 • ② PCR反应。 • DNA的质量分析 • • CaMV35S启动子的定量 PCR反应 • （ 2）定量竞争 PCR法 PCR反应实质是对特定模板 DNA的指数扩增放大，而在相同的条件下，获得 DNA的量与最初模板DNA的浓度成正相关，竞争定量 PCR就是依据这种扩增 DNA与模板 DNA之间的浓度相关性设计的。 基本原理是先构建含有修饰过的内部标准 DNA片段 (竞争 DNA)，竞争 DNA由质粒组成，带有一个改造 PCR扩增子，改造部分可以是 DNA插人序列、缺失序列或者点突变，竞争 DNA与待测目标 DNA在同一反应管中进行 PCR共扩增，因竞争 DNA片段和待测 DNA的大小不同，经琼脂糖凝胶可将两者分开，通过比较两种条带的量可进行定量分析。 • （ 三）生物芯片与转基因产品检测 • 就目前转基因食品检测中常用的 ELISA和 PCR技术而言，最大的缺点是检测范围窄，效率低，无法高通量大规模地同时检测多种样品，尤其是对转基因背景一无所知的情况下。 对各种候选待检基因序列或蛋白的逐一筛查几乎是不可能的。 而目前正在研究的转基因产品所涉及的基因数量有上万种，今后都有可能进入商品化生产，显而易见对进出口产品的检测，需要有更有效的、快速、特别是高通量的检测方法，最近几年出现的生物芯片技术能较好地解决这一问题。