rt-pcr实验心得(编辑修改稿)

rt-pcr实验心得(编辑修改稿)内容摘要：

， 31 个循环 , 72℃ 7min。 ■ 电泳 1 电泳缓冲液 : TBE:工作缓冲液 TBE,我的是 10TBE 的浓缩液 , 100ml 的 10TBE 的浓缩液加入 1900 的三蒸水 ,既是为 . 6缓冲液上样缓冲液 (4℃ 保存 ) ■ % / %:琼脂糖凝胶的配制及用法 : 找干净的容积大约为 100ml 的瓶子 ,加琼脂糖 再加 50ml 电泳缓冲液(或 :+100ml 电泳缓冲液 )，微波炉中火 60 秒至沸腾，取出 ,熔化的琼脂物冷却 ,用 1ml 的移液枪 ,取琼脂糖凝胶封底后将温热的凝胶倒入 已置好梳子的胶膜中 ，在室温下放置 3045min 后现进行电泳。 (注意 :加槽的注意事项(平行放。 滴 /泡沾缓冲液 )。 取槽时的注意事项。 先取出凝胶盒 ,放侧板和梳子 ,在封底凝固后 ,到入凝胶 ,跑电泳时在取梳和侧板 ,此时凝胶和电泳液相混 !注意不要有气泡 ! ) ■ PCR 产物电泳 取 目的基因 RTPCR产物 各 10μl及 内参 RTPCR产物 各 5μl加已点在纸上的 (只要干净即可 !)溴酸兰 (即 6缓冲液上样缓冲液 )量大约 12ul(量宜大不宜小 ,否则难以下沉 )，反复吸打混匀 (操作时注意事项 :不要有气泡 ,关键是不要压枪到头 !)用移液枪滴加到小槽内 (操作的注意事项 ,伸入液面下 ,但不要碰到胶 !) 后进行电泳 ! Maker 的不加 ,直接移液枪滴加到小槽内 . ■ SYBR ■ SYBRGreen I 染色方法 1 配制 : 用 PH 的缓冲液（如： TAE， TBE 或 TE），按照 10000： 1的比例稀释 SYBR GreenⅠ 浓缩液，混匀，制成染色溶液。 TBE pH 的要求 : (最好 pH ).用水配稳定性不好 (要在 24h 内用 !)!配液时双层戴手套 ,试剂要常温解冻 ,离心再配 ! :塑料和 tip 头盒中 避光保存 ,不要放在玻璃容器中 ////染色屋最好设立单独房间 . :将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。 室温振荡染色 1030 分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。 (可保存一周多 ,重复用 4 次 !) 为 10mA，电源 100V，电泳 30 分钟，紫外灯下观察，满意的结果扫描打印。 ■ 实验前期准备 预防 RNA 酶污染 : * 全程佩戴一次性手套。 皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染 RNA 的抽提并成。