1—1光学显微镜的构造(编辑修改稿)

1—1光学显微镜的构造(编辑修改稿)内容摘要：

配好的链霉素溶液保存于－ 20℃），在100mL 培养基中加 1％链霉素 ，使每毫升培养基中含链霉素 30μ g。 四、注意事项 称药品用的牛角匙不要混用；称完药品应及时盖紧瓶盖。 调 pH 时要小心操作，避免回调。 不同培养基各有配制特点，要注意具体操作。 五、演示 1．培养基的分装方法。 2．试管斜面的搁置方法。 六、实验报告 记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。 七、问题和思考 1．配制培养基有哪几个步骤。 在操作过程中应注意些什么问题。 为什么。 2．培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌。 若不能及时灭菌应如 何处理。 已灭菌的培养基如何进行无菌检查。 3．试设计实验对饮料进行无菌检查。 16 实验 5 消毒和灭菌 一、目的和内容 （一）目的：了解消毒和灭菌的原理，并掌握各种灭菌方法的操作步骤。 （二）内容： 1．高压蒸汽灭菌法。 2．干热灭菌法。 3．过滤除菌法。 二、材料和用具 待灭菌的培养基和链霉素溶液。 手提式高压蒸汽灭菌锅、电热烘箱、过滤除菌器、培养皿、试管。 三、操作步骤 （一）高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌法适用于培养基、无菌水、工作服等物品的灭菌。 1．加水 将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，以水面与三角架相平为宜。 2．装料 将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。 装有培养基的容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶壁，以防冷凝水沾湿棉塞。 3．加盖 将盖上与排气孔相连接的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，并打开排气阀。 4．排气 用电炉或煤气加热，待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔排出。 一般认为，当排出的气流很强并有嘘声时，表明锅内空气已排净（沸后约 5min）。 5．升压 当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。 6．保压 当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源，开始计时并维持压力至所需时间。 本实验用 121℃， 20min 灭菌。 7．降压 达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下降到零后，打开排气阀。 放净余下的蒸汽后，再打开锅盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。 8．无菌检查 将已灭菌培养基于 37℃培养 24h，无杂菌生长，即可待用。 （二）干热灭菌法 干热灭菌法适用于玻璃器皿，如试管、培养皿、三角瓶、移液管等的灭菌。 1．装入待灭菌物品 预先将各种器皿用纸包好 或装入金属制的培养皿筒、移液管筒 17 内，然后放入电热烘箱中。 2．升温 关好电烘箱门，打开电源开关，旋动恒温调节器至所需温度刻度（本实验所需为 160— 170℃），此时烘箱红灯亮，表明烘箱已开始加热，当温度上升至所设定温度后，则烘箱绿灯亮，表示已停止加温。 3．恒温 当温度升到所需温度后，维持此温度 2h。 4．降温 切断电源，自然降温。 5．取出灭菌物品 待电烘箱内温度降到 70℃以下后，才能打开箱门，取出灭菌物品。 （三）过滤除菌法 有些物质，如抗生素、血清、维生素等易受热分解，因而要采用过滤除菌法。 1．过滤器的种类 （ 1）滤膜过滤器：由醋酸纤维素、硝酸纤维素等制成，有孔径大小不同的多种规格（如 m、 m、 m、 m 等），过滤细菌常用 m 孔径。 其优点是吸附性小，即溶液中的物质损耗少，滤速快，每张滤膜只使用 1 次，不用清洗。 （ 2）蔡氏滤器：是一种金属制成的过滤漏斗，其过滤部分是一种用石棉纤维和其他填充物压制成的片状结构。 溶液中的细菌通过石棉纤维的吸附和过滤而被去除，但对溶液中其他物质的吸附性也大。 每张纤维板只能使用 1 次。 （ 3）玻璃滤器：是一种由玻璃制成的过滤漏斗，其过滤 部分是由细玻璃粉烧结成的板状构造。 玻璃滤器规格很多， 5 号（孔径 2～ 5μ m）和 6 号（孔径小于 2μ m）适用于过滤细菌。 其优点是吸附量少，但每次使用后要洗净再用。 清洗方法是：用水充分冲洗，然后浸于含 1%KNO3的浓硫酸中 24h，再用蒸馏水抽洗数次。 在抽洗液中加入数滴 BaCl2，至不出现 BaSO4沉淀时，即表示已洗净。 2．过滤装置 （ 1）按图 51进行安装，为阻止空气中细菌进入滤瓶而在接管处塞入棉花，外用纸包好进行 121℃湿热灭菌 20min。 图 51 过滤装置 18 （ 2）为加快过滤速度，一般用负 压抽气过滤，即在自来水龙头上装一抽气装置，利用自来水流造成负压。 若接真空泵进行抽滤则速度更快。 四、注意事项 1．使用灭菌锅应严格按照操作程序进行，避免发生事故；灭菌时，操作者切勿擅自离开；务必待压力下降到零后，才可打开锅盖。 2．干热灭菌时电烘箱中物品不要摆得太拥挤，以免阻碍空气流通而影响灭菌效果；灭菌物品不要与电烘箱内壁的铁板接触，以防包装纸烤焦起火。 3．过滤除菌时应注意检查过滤装置各连接处是否漏气，以防污染。 五、演示 1．高压蒸汽灭菌锅的结构及使用方法。 2．过滤除菌装置的安装。 六、实验报告 1．记录各种不同物品所用的灭菌方法及灭菌条件 (温度、压力等 )。 2．试述高压蒸汽灭菌的操作过程及注意事项。 七、问题和思考 1．比较各种灭菌方法的原理及适用范围。 2．高压蒸汽灭菌中为什么要把冷空气排净，为什么在灭菌后不能骤然快速降压。 并要在放尽锅内蒸汽才能打开锅盖。 3．在检测某水体是否存在病毒的实验中，如何排除细胞型生物的干扰。 试设计一实验。 19 实验 6 微生物菌落的观察 一、目的和内容 （一）目的：识别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌四大类微生物的菌落特征。 （二）内容： 1．观察已知菌的菌落 的形态、大小、色泽、透明度、致密度和边缘等特征。 2. 根据菌落的形态特征判断未知菌的类别。 二、材料和用具 大肠杆菌（ ）、金黄色葡萄球菌（ Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis）、酿酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae）、粘红酵母（ Rhodotorula gracitis）、热带假丝酵母（ Candida tropicalis）、细黄链霉菌（ Streptomyces microflavus，又称“ 5406”抗生菌）、灰色 链霉菌（ Streptomyces griseus）、黑曲霉（ Aspergillus niger）、产黄青霉（ Penicillium chrysogenum）、球孢白僵菌（ Beauveria bassiana）等细菌的斜面菌种。 牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基、高氏 1 号培养基、无菌水。 接种环、接种针、酒精灯、无菌培养皿多套、电热恒温箱。 三、操作步骤 （一）制备已知菌的单菌落 1．制备平板 将已融化的无菌培养基待冷却至 50℃左右，倒入平皿中，分别制备牛肉膏蛋白胨培养基平板、马铃薯蔗糖培养基平板和高氏 1 号 培养基平板各一皿。 2．制备菌悬液或孢子悬液 在培养好的斜面菌种管内加入 5mL 无菌水，制成菌悬液后备用。 3．制备单菌落 通过平板划线法获得细菌、酵母菌和放线菌的单菌落。 用三点接种法获得霉菌的单菌落。 细菌于 37℃恒温培养 24～ 48h，酵母菌于 28℃培养 2～ 3d，霉菌和放线菌置 28℃培养 5～ 7d，待长成菌落后，仔细观察四大类微生物菌落的形态特征，并将观察结果记录于表 61 中。 （二）制备未知菌落 1．倒平板 2．接种 可用弹土法接种，其要点为：采集校园土壤，待风干磨碎后，可将细土撒在无菌的硬板纸表面，先 弹去纸面浮土，然后打开皿盖，使含土的纸面对着平板培养基的表面，用手指在硬板纸背面轻轻一弹即可接种上各种微生物。 20 3．培养 将牛肉膏蛋白胨培养基平板倒置于 37℃培养箱中恒温培养 2～ 3d，将马铃薯蔗糖培养基倒置于 28℃培养箱中恒温培养 3～ 5d，即可获得未知菌的单菌落。 4．编号 从培养好的未知平板中，挑选 8 个不同的单菌落，逐个编号，根据菌落识别要点区分未知菌落类群，并将判断结果填入表 62 中。 （三）直接观察菌落 直接用实验 3 中的“土壤稀释分离”获得的单菌落进行观察识别，并将结果填入表62 中。 四、注意事 项 观察菌落特点时，要选择分离得很开的单个较大菌落；已知菌落和未知菌落要编好号，请勿随意移动开盖，以免搞混菌号。 五、演示 弹土法制备未知菌落。 六、实验报告 1．已知菌落的形态特征记录于表 61 中。 2．将未知菌落的辨别结果记录于表 62 中。 七、问题和思考 1．试比较细菌、放线菌、酵母菌和霉菌菌落形态的差异 ? 2．设计一个实验，检测实验室空气环境中的微生物类别 ? 表 61 已知菌菌落的形态 微类 生 物群 菌 名 辨别要点 菌 落 描 述 湿 干 表面 边缘 隆起 形状 颜 色 透 明 度 厚薄 大小 松密 大小 正面 反面 水溶性色素 细 菌 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 枯草杆菌 酵 母 菌 酿酒酵母 粘红酵母 热带假丝酵母 21 放 线 菌 细黄链霉菌 灰色链霉菌 霉 菌 产黄青霉黑曲霉 黑曲霉 球孢白僵菌 表 62 未知菌菌落的形态 菌 落 号 湿 干 菌 落 描 述 判断结果 厚薄 大小 松密 大小 表面 边缘 隆起形状 颜 色 透明度 正面 反面 水溶性色素 1 2 1 2 3 4 5 6 7 8 22 实验 7 细菌形态的观察 一、目的和内容 （一）目的：巩固油镜的使用；掌握细菌形态观察的基本方法 ,了解细菌的基本形态。 （二）内容： 1．观察细菌的基本形态染色装片。 2．观察枯草芽孢杆菌活菌。 3．观察细菌细胞结构的染色装片。 二、材料和用具 溶血链球菌（ Streptococcus haemolyticus）、棒杆菌（ Corynebacterium sp．）、螺菌（ Spirillum sp.）、浮游球衣菌（ Sphaerotilus natans）、巨大芽孢杆菌（ Bacillus megaterium）、苏云金芽孢杆菌（ Bacillus thuringiensis）、普通变形菌（ Proteus vulgaris）、丙酮丁醇梭菌（ Clostridium acetobucylicum）、褐球固氮菌（ Azotobacter chroococcum）等细菌的染色装片，枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis）的斜面菌种。 香柏油、二甲苯、无 菌水。 显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、吸水纸、小滴管。 三、操作步骤 （一）观察细菌的基本形态 用低倍镜、高倍镜和油镜观察溶血链球菌、棒杆菌、螺菌、浮游球衣菌的染色装片镜下绘图。 （二）观察细菌的细胞结构 用低倍镜、高倍镜和油镜观察巨大芽孢杆菌（示细胞壁）、巨大芽孢杆菌（示异染粒）、苏云金芽孢杆菌（示伴胞晶体）、普通变形菌（示鞭毛）、丙酮丁醇梭菌（示芽孢）、褐球固氮菌（示荚膜）等细菌的染色装片，并分别在油镜下绘图。 （三）观察枯草芽孢杆菌活菌 常用压滴法（图 71） 1．将洁净无油腻的载片 放于自己右边前方，在中央放一小滴无菌水。 2．将酒精灯放于自己正前方，点燃。 3．用无菌操作方法从枯草芽孢杆菌斜面中沾取少量菌体，与载片上的水滴充分混匀，把接种环上残留的菌体杀灭后，放回试管架。 4．用镊子夹一洁净的盖玻片，使其一边先接触菌液，然后将整个盖玻片慢慢放下， 23 注意不要产生气泡。 如菌液过多，可用吸水纸适当吸去一部分。 5．先用低倍镜然后转用高倍镜观察，观察时光线要适当调暗些。 图 71 压滴法制片示意图 四、注意事项 1．注意擦镜头时，只能用擦镜纸。 2．观察完毕，必须 将镜筒上升，才能取下装片，放入另一装片后，要按使用油镜要求，重新操作，不能在油镜下直接取下和替换装片，切记 ! 3．无菌操作过程中，接种环灭菌后不能触及其他物品，挑菌不能过多。 五、演示 1．细菌细胞结构装片示范镜。 2．无菌操作过程。 3．怎样盖盖玻片才不产生气泡。 六、实验报告 （一）绘图 1．绘出你所观察到的几种细菌的个体形态视野图。 2．绘出你所观察到的细菌细胞结构视野图，并注明各部分。 24 （二）试指出在制备活菌装片时，应注意什么问题 ?。