生物制药工艺学-生物制药工艺技术基础-医药保健(编辑修改稿)

生物制药工艺学-生物制药工艺技术基础-医药保健(编辑修改稿)内容摘要：

甘油，混匀速冻，冻存于－ 70~－ 80℃ . （五）组织与细胞的破碎 组织与细胞的破碎方法有物理法、化学法与生物法。 （ 1）磨切法 工业上常用的有绞肉机，刨胰机，球磨机、磨粉机。 实验室常用的有匀浆机，研钵，高速组织捣碎机。 （ 2）压力法 有压榨法、高压法和减压法，渗透压法。 （ 3）超声波法 （ 4）反复冻融法 用稀酸、稀碱、浓盐、有机溶剂或表面活性剂处理细胞，可破坏细胞结构释放出内容物。 （ 1）组织自溶法 利用组织中自身溶解酶的作用改变、破坏细胞结构，释放出目的物称为组织自溶法。 (2) 酶解法 用外来酶处理生物材料，如用溶菌酶处理某些细菌，蜗牛酶等 （ 3）噬菌体法 用噬菌体感染细胞、裂解细胞，释放出内容物。 （六）细胞器的分离 为获得结合在细胞器上的一些生化成分或酶系，常常要先得到细胞器再进一步分离有效成分。 方法是匀浆破碎细胞，差速离心。 第二节 生物活性物质的提取 提取是利用制备目的物的溶解特性，将目的物与细胞的固形物成分或其它结合成分分离，使其由固相转入液相或从细胞生理状态转入特定溶液环境的过程。 一、物质性质与提取 （一）物质的性质与提取方法的选择 要取得好的提取效果，最重要的是要针对生物材料和目的物的性质选择合适的溶剂系统与提取条件。 生物材料及其目的物与提取有关的一些性状包括溶解性质、分子量、等电点、存在方式、稳定性、比重、粒度、粘度，目的物含量，主要杂质种类及溶解性质，有关酶的特征等。 其中最主要的是目的物与主要杂质在溶解度方面的差异以及它们的稳定性。 操作者可根据文献资料及本人的试验摸索获得的有关信息，在提取过程中增加目的物的溶出度，尽可能减少杂质的溶出度。 （二）活性物质的保护措施 （ 1）采用缓冲盐系统 在生物药物制备中，常用的缓冲盐有磷酸缓冲盐，柠檬酸缓冲盐， Tris缓冲液，醋酸缓冲盐，碳酸缓冲盐，硼酸缓冲盐和巴比妥缓冲盐等。 （ 2）添加保护剂 防止某些生理活性物质的活性基团及酶的活性中心受到破坏，如巯基是许多活性蛋白质和酶催化活性基团，极易被氧化，故提取时，常添加某些还原剂如半胱氨酸， －巯基乙醇。 对易受重金属影响的，可添加EDTA。 （ 3）抑制水解酶的作用 （ 4）其它保护措施（冷、热、酸、碱） 二、物质的性质与溶解度 （一）物质溶解度的一般规律 相似相溶 （二）水在生化物质提取中的作用 水是提取生化物质的常用溶剂。 水分子的存在可使其它生物分子之间的氢键减弱，而与水分子形成氢键，水分子还能使溶质分子的离子键解离，这就是所谓的水合作用。 水合作用促使蛋白质、核酸、多糖等生物大分子与水形成了水合分子或水合离子从而促使它们溶解于水或水溶液中。 三、提取效率 四、影响提取的因素 （一）温度 多数物质的溶解度随提取温度的升高而增加。 另外较高的温度可以降低物料的粘度，有利于分子扩散和机械搅拌，所以对耐热成分的提取可以用加热的方法。 对不耐热的生物活性物质的提取，一般在 0~10℃ 进行提取。 (二 )酸碱度 多数生化物质在中性条件下较稳定， pH值一般应控制在 4～ 9范围内，为了增加目的物的溶解度，往往要避免目的物的等电点附近进行提取。 巧妙地选择溶剂系统的 pH值不但直接影响目的物与杂质溶解度，还可以抑制有害酶类的水解破坏作用，防止降解，提高收率。 （三）盐浓度 盐溶作用 盐析作用 五、提取方法 （一）用酸、碱、盐水溶液提取 （二）表面活性剂提取 表面活性剂分子兼有亲水与疏水基团，分布于油水界面时，有分散、乳化和增溶作用。 表面活性剂分阴离子型、阳离子型与非离子型。 离子型表面活性剂作用强，但是易引起蛋白质等生物大分子的变性，非离子表面活性剂变性作用小，适合于用水、盐系统无法提取的提取的蛋白质或酶的提取。 （三）有机溶剂提取 －液提取 丙酮从动物脑中提取胆固醇， 溶剂分级提取：如先用丙酮，再用乙醇，最后用乙醚提取。 石油醚，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇，甲醇。 丙酮粉 －液萃取。