植物油中抗氧化剂tbhq检测方法研究_毕业论文(编辑修改稿)

植物油中抗氧化剂tbhq检测方法研究_毕业论文(编辑修改稿)内容摘要：

的抗氧化效果是很强的。 2020级食品科学与工程毕业论文 6 2 材料与方法 实验 仪器 表 21 主要实验仪器 仪器名称 生产厂家 SP6800A 气相色谱仪 岛津企业管理（中国）有限公司 数显恒温水浴锅 金坛市晶波实验仪器厂 分析天平 上海民桥精密科学仪器有限公司 电子天平 上海民桥精密科学仪器有限公司 实验材料与试剂 表 22 实验材料与方法 材料与试剂名称 生产厂家 TBHQ 标准样品 国药集团化学试剂有限公司 甲醇（分析纯） 国药集团化学试剂有限公司 乙腈（分析纯） 国药集团化学试剂有限公司 95%乙醇（ 分析纯） 国药集团化学试剂有限公司 无水乙醇（分析纯） 国药集团化学试剂有限公司 二硫化碳（分析纯） 国药集团化学试剂有限公司 金龙鱼菜籽油 购于肥东华联超市 实验方法（国标方法 GB/） 实验操作流程 样品 预处理 分离提取 气相色谱自动进样测定 2020级食品科学与工程毕业论文 7 实验操作预处理 TBHQ 标准品预处理 利用分析天平准确称取叔丁基对苯二酚（ TBHQ） 于烧杯中，用 1mL 的无水乙 醇溶解 TBHQ 晶体后，加入少量的二硫化碳混合，混合液倒入 100mL 棕色容量瓶中。 再用 1mL 的无水乙醇洗涤烧杯后，加入少量的二硫化碳，清洗液一并倒入容量瓶中，最后用二硫化碳稀释至 100mL。 此标准溶液浓度为 1mg/mL，置于 4℃ 冰箱中保存待用。 样品预处理 准确称取菜籽油试样 25mL 比色管中，加入 5mLL80%的乙醇溶液，振摇 1min，静止片刻，放在 90℃ 左右的水浴锅中加热 30s，促其分层。 分层后，将上清液用移液管转移到 60mL 的瓷蒸发皿中（勿将油滴带入），再用 5mL 的 80%的乙 醇溶液重复提取两次，提取液一并倒入蒸发皿中，将蒸发皿放在 60℃ 的水浴锅上通风挥发近干（切勿蒸干）。 在蒸发皿中加入二硫化碳，用小玻璃棒少量多次洗涤蒸发皿中残留物，转移到 2mL容量瓶中，试液作为试样测定液。 色谱柱条件 [14] 色谱柱：玻璃柱，内径 3mm,长 3m，内装涂有 2%OV1 固定液的酸洗硅烷化处理的白色硅藻土载体（ Chromosorb W AW DMCS） ,粒度 80100 目。 检测器温度： 250℃ ，汽化室温度： 160℃ ，柱温： 250℃。 氮气 （ N2） ： 30mL/min，氢气 （ H2）： 50mL/min，空气： 600mL/min。 标准曲线的建立 标准品储备液的配制 准确称取上述 处理的 TBHQ 标准储备液 （ 1mg/mL） ，用二硫化碳定容，分别稀释成浓度分别为 、 50ug/mL、 ug/mL、 150 ug/mL、 200 ug/mL、 250 ug/mL 的标准溶液，用一次性吸管将上述不同浓度的标准储备液装入样品瓶中，放入气相色谱的滑槽中，准备进样。 标品进样检测 打开电源总开关，打开气阀设置气压，氢气 （ H2）： ，氮气 （ N2）： ，2020级食品科学与工程毕业论文 8 空气：。 打开气相色谱仪开关，并打开软件工作站，联机进行开始进样。 开始进样前若玻璃柱长久未用，一定要将柱子进行老化。 老化的方法多采用气体流动法 ,将柱入口与进样室相连 ,出口勿接检测器 ,通小流量 (一般为 510mL/min)的载气 ,以 (24)℃ /min 程序升温至低于固定液最高使用温度 2030℃ ,老化 1224h,获得平稳基线 ,待基线稳定后，便可以开始进样。 根据保留时间进行定性，根据峰面积进行定量。 根据不同浓度的标品即可绘制标准曲线。 样品含量测定 根据上述样品的 处理方法，利用一次性吸管将用二硫化碳定容的样品溶液装入样品瓶中，气相自动进样。 根据上述的标准曲线，再根据出峰的保留时间和出峰的面积，即可得出样品中 TBHQ 的含量。 样品预处理优化实验 本实验依国标方法 （ GB/）中的测定油脂中 TBHQ（叔丁基对苯二酚）的方法的基础之上对菜籽油中 TBHQ 测定方法进行改进研究，主要是对油脂预处理方面进行改变处理，获得最佳的检测效果的预处理条件，最后对该方法的检测结果与国标方法的检测结果在准确度和精密度方 面进行对照比较，验证该方法的可行性。 提取溶剂选择 本实验是在国标方法中采用乙醇作为提取溶剂的基础上，研究再采用有机溶剂甲醇、乙腈分别对植物油中的 TBHQ 进行提取，并采用加标回收的方法确定三种溶剂对植物油的提取效果。 具体操作步骤： 吸取 2mL 的菜籽油，分别加入 100ug/mL 的标准品 2mL，分别吸取 5mL 的甲醇、乙醇和乙腈对菜籽油进行提取，按照 的方 法对样品进行处理，每个样品平行做五次，然后用气相色谱进行自动进样测定，计算比较计算结果，回收率较好者为最佳。 提取条件优化 在上述得出最佳的提取溶剂后，在本实验可能影响到抗氧化剂的因素有提取溶剂的总体积、混匀时间、溶剂提取次数和水浴温度，采用加标回收的方法，均在样品中加入100ug/mL 的 TBHQ 标准品 2mL。 2020级食品科学与工程毕业论文 9 单因素实验 （ 1）提取溶剂体积 选取提取溶剂分别为 2mL、 4mL 和 6mL 和 8mL 的乙醇溶液对样品进行提取三次，按照 方法，其他条件不变，测定其回收率 （ 2） 混合时间 分别选取混合时间分别为 1min、 3min 和 5min，其他条件不变，测定其回收率。 （ 3） 提取 次数 分别选取提取次数为 2 和 3，其他条件不变，测定其回收率。 （ 4） 水浴温度 分别选取水浴温度为 60℃、 70℃、 80℃、 90℃和 100℃ ，其他条件不变，测定其回收率。 （ 5） 水浴时间 分别选取水浴时间为 10s、 20s、 30s 和 40s，其他条件不变，测定其回收率。 正交试验 在单因素实验的基础上，选取提取溶剂的体积、混合时间、提取次数和水浴温度四个因素水平进行正交优化实验，采取加标回收的方法得出最佳的溶剂提取条件，使样品预处理条件为最优。 本实验采用 L9(34 )进行正交优化实验 [15]见下表： 表 23 L9(34)正交试验因素水平编码表 水平 试验因素 溶剂体积 /mL A 混合时间 /min B 提取次数 C 水浴温度 /℃ D 1 2 1 1 100 2 4 2 2 80 3 6 3 3 60 2020级食品科学与工程毕业论文 10 实验结果评定 精密度测定 精密度： 指在相同条件下 N 次重复测定结果彼此相符合的程度。 精密度大小用偏差表示，偏差越小，精密度越高。 本实验直接采用标准样品的精密度对其方法进行判定。 其操作步骤如下： 采用国标方法精密度测定 吸取 TBHQ 标准品浓度分别为 50ug/mL、 100 ug/mL、 200 ug/mL 的溶液 2mL 于 25mL比色管中，加入 5mL 80%乙醇溶液，振摇 1min，静置片刻，放入 90℃ 的水浴中加热 30s，促其分层。 分层后，将上清液用移液管转移到 60mL 的瓷蒸发皿中，再用 5mL 的 80%的乙醇溶液重复提取两次，提取液一并倒入蒸发皿中，将蒸发皿放在 60℃ 的水浴锅上通风挥发近干（切勿蒸干）。 在蒸发皿中加入二硫化碳， 用小玻璃棒少量多次洗涤蒸发皿中残留物，转移到 2mL 容量瓶中，试液作为试样测定液。 按照 的色谱条件进行自动进样，每个组每个浓度平行做七次，测定其浓度含量，计算其平均值、标准差和相对标准偏差。 采用优化后方法精密度测定 吸取 TBHQ 标准品浓度分别为 50ug/mL、 100 ug/mL、 200 ug/mL 的溶液 2mL 于 25mL比色管中，采用优化后的条件，即加入 6mL 80%的乙醇溶液，振摇 2min，然后再用 6mL的乙醇溶液提取一次，放入 80℃ 的水浴锅中水浴 30s，其它条件与国标方法相同。 按 照 的色谱条件进行自动进样，每个组每个浓度平行做七次，测定其浓度含量，计算其平均值、标准差和相对标准偏差。 将两者测定的结果进行比较对照，确定哪种方法更为准确。 回收率测定 本实验采用加标回收的方法测定回收率 [16] 采用国标方法测定回收率 用移液管分别取 TBHQ标准储备液 100mg/mL、 150 mg/mL、 250 mg/mL 各 2mL于 25mL的比色管中，并在比色管中加入 2mL 的样品（即菜籽油）溶液，加入 5mL 的 80%乙醇溶2020级食品科学与工程毕业论文 11 液（ 80%乙醇是将 95%乙醇 80mL 和 15mL 蒸馏水混合配置而成）。 振摇 1min，静置片刻，放入 90℃ 左右的水浴中加热 30s，待其分层。 分层后，将上层澄清提取液用吸管转移到蒸发皿中（切勿将油滴带入）。 再用 5mL 的 80%乙醇溶液重复提取两次。 提取液一并加入到蒸发皿中。 将蒸发皿放入 60℃ 的水浴上通风挥发或自然挥发至近干（切勿蒸干）并同时做空白实验 [17]。 在蒸发皿中加入二硫化碳，用小玻璃棒少量多次洗涤蒸发皿中残留物，转移到 2mL 容量瓶中，试液作为试样测定液。 每个加标浓度做六次平行试验，利用标准曲线查出样品加标回收的浓度，取平均值并计算回收率 [18]。 采用优化处理方法测定回收率 用移液管分别吸取 TBHQ 标准储备液 100mg/mL、 150 mg/mL、 250 mg/mL 各 2mL 于25mL 的比色管中，并在比色管中加入 2mL 的样品（即菜籽油）溶液，采用优化后的条件，即加入 6mL 80%的乙醇溶液，振摇 2min，然后再用 6mL 的乙醇溶液提取一次，放入 80℃的水浴锅中水浴 30s，其它条件与国标方法相同。 每个加标浓度也是平行做六次，计算回收率。 将两种方法测定的回收率进行比较对照。 3 结果与分析 气相色谱法绘制叔丁基对苯二酚（ TBHQ）的标准曲线 采用国标方法，将标准样品稀释成浓度为 50ug/mL、 100ug/mL、 150ug/mL、 200ug/mL、250ug/mL 的标准液，采用气相自动进样，测得结果以浓度 （ ug/mL） 为横坐标，以峰面积（ UV*S） 为纵坐标绘制标准曲线，其结果见表 31 和图 31。 表 31 标准品浓度与峰面积表 浓度 (ug/mL) 峰面积 （ UV*S） 69094 127370 193676 240462 319013 2020级食品科学与工程毕业论文 12 0 25000 50000 75000 100000 125000 150000 175000 202000 225000 250000 275000 300000 峰面积0 . 0 00 . 2 50 . 5 00 . 7 51 . 0 01 . 2 51 . 5。