铅离子胁迫对丹参幼苗生理活性的影响毕业论文(编辑修改稿)

铅离子胁迫对丹参幼苗生理活性的影响毕业论文(编辑修改稿)内容摘要：

）的花盆中培养，每 3 珠一盆，花盆放于露天的土地上。 一共设定 6 个组，编号 ：① (对照 )、②、③、④、⑤、⑥ ,其 Pb2+浓度分别为 0、 100 mg/L、 200 mg/L、 400 mg/L、800 mg/L、 1600mg/L。 对照组定时加入不含铅的营养液，其他分组同时加入不 同浓度的含铅培养液。 测定含水量 将叶片从丹参植株上取下后，迅速剪成小块，置于称量纸上用电子天平称重，记为 Wf。 将称重后的叶片装入洁净培养皿中，于 105℃烘箱中干燥 4— 6h(注意培养皿不能盖盖子 )。 取出培养皿和叶片冷却至室温，用电子天平称叶片的重 量。 然后将叶片放入培养皿中再烘 2小时，取出烧杯和叶片冷却至室温，用电子天平绵阳师范学 2020届毕业论 铅离子胁迫对丹参幼苗生理活性的影响 3 称叶片的重量，这样重复几次，直至恒重为止。 称得叶片干重 Wd。 烘时注意防止植物材料焦化，如所取材料为幼嫩组织可先用 l00－ 105℃杀死组织后，再在80℃下烘至恒重。 计算： 鲜重含水量（％）＝（ Wf Wd） / Wf * 100% 干重含水量（％）＝（ Wf Wd） / Wd * 100% 叶绿素含量的测定 取不同浓度等量丹参叶片 [10,12,14]，擦净组织表面污物，分别剪碎（去掉中脉），混匀。 称取剪碎的新鲜样品 ，放入研钵中，加少量碳酸钙和石英砂及 2～3ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇 10ml，暗处静置 3～ 5min。 取滤纸 1 张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到 25ml 棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最 后连同残渣一起倒入漏斗中，用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。 直至滤纸和残渣中无绿色为止。 最后用乙醇定容至 25ml，摇匀，把叶绿体色素提取液稀释 5 倍后倒入光径 1cm 的比色杯内。 以 95％乙醇为参比，在波长 663nm、 645nm 下测定光密度。 将测定得到的吸光值代入下面的式子： LambertBee 定律 Ca= D663— ……… (3) Cb= D645— D663……… (4) G总 =Ca+Cb=+……… (5)式中的 D66 D645 为叶绿素溶液在波长 663nm 和 645nm 时的光密度。 Ca、 Cb 为叶绿素 a、 b 浓度，单位为 :mg/L。 分别计算叶绿素 a、 b和总叶绿素的含量 叶绿素含量等于 脯氨酸含量的测定 脯氨酸标准曲线的制作 取 7 支试管 [10,17]，编号，按下表配制每管含量为 0～ 6μ g 的脯氨酸标准液。 加入表中试剂后，置于沸水浴中加热 30min。 取出冷却，各试管再加入 4ml 甲苯，振荡 30 秒钟，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯 溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，在 520mm 波长处测定吸光度（ A）值。 以 1～ 5 号管脯氨酸含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 样品鲜重稀释倍数提取液体积叶绿素的浓度   1000绵阳师范学 2020届毕业论 铅离子胁迫对丹参幼苗生理活性的影响 4 表 1 标准样的配制 Confecting of the standard samples 试 剂 管号 1 2 3 4 5 6 7 10μ g ml1脯氨酸标准液（ ml） 0 蒸馏水（ ml） 2 冰醋酸（ ml） 2 2 2 2 2 2 2 ﹪酸性茚三酮（ ml） 2 2 2 2 2 2 2 每管脯氨酸含量（μ g） 0 1 2 3 4 5 6 脯氨酸的提取和测定 取不同处理的植物材料各 [10,19]，分别置大试管中，然后向各管分别加入5ml 3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取 10min（提取过程中要经常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。 吸取 2ml 提取液于带玻塞试管中，加入 2ml 冰醋酸及 2ml ﹪酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热 30min，溶液即呈红色。 冷却后加入 4ml 甲苯， 摇荡 30 秒钟，静置片刻，取上层液至 10ml离心管中，在 3000r/min 离心 5min。 用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，在 520mm波长处测定吸光度（ A）值。 计 算 从标 准 曲线上 查出 样 品 测 定液中脯氨酸的含量 [14]，按下公式 计 算 样 品中脯氨酸含量： 脯氨酸含量 （ μgg－ 1Fw） ＝ [X 提取液总量（ ml） ]/ [ 样品鲜重（ g） 测定时提取液用量（ ml） ] 公式中： X － 从标 准 曲线 中查得的脯氨酸含 量（μ g） 丙二醛的含量测定 采用二硫代巴比妥酸显色法 [10,18,29,21]。 分别称取不同浓度植物叶片 ，加入少量石英砂和 10%三氯乙酸 2ml，研磨至匀浆，再加 8ml 10%三氯乙酸进一步研磨，匀浆以 4000r/min 离心 10min，其上清液为丙二醛提取液。 取 8支干净试管，编号， 7只为样品管（七个重复），各加入提取液 2ml。 对照管加蒸馏水 2ml，迅速各管再加入 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀，混合液在沸水浴中反应 15min，迅速冷却后再离心，取上清液分别在 53 600、 450nm波长下测定吸光度（ A）值。 由于蔗糖 — TBA 反应产物的最大吸收波长为 450nm，毫摩尔吸收系数为—TBA 反应产物在 532nm 的毫摩尔吸收系数分别为 103 和155103。 532nm 非特异性吸光值可以 600nm 波长处的吸光值代替。 按双组分分光光度法原理，建立方程组，解此方程组 A453=(103） C 糖 A532—A600=（ 155103) CMDA+(103) C 糖 绵阳师范学 2020届毕业论 铅离子胁迫对丹参幼苗生理活性的影响 5 酶活性的测定 酶液提取 取 5g 洗净的丹参叶片 [10,20,24,25]，放入研钵中，加入适量的磷酸缓冲液，研磨成匀浆。 将匀浆液全部转入离心管中，于 3000g 离心 10min，上清液转入 25ml容量瓶中。 沉淀用 5ml 磷酸缓冲液再提取 2 次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，低温下保存备用。 过氧化物酶活性测定 酶 活 性 测定 的 反应 体 系包 括 [25,28] ： ；%H2O2；。 以加热煮沸 5min的酶液为对照，反 应体系加入酶液后，立即于 34℃水浴中保温 3min，然后迅速稀释 1倍， 470nm 波长下比色，每隔 1min 记录 1 次吸光度（ A470），共记录 5次。 结果计算 以每分钟内 A470变化 为 1个酶活力单位（ U）。 过氧化物酶活力（ U g1鲜重 min1） =t**V*W V*A470S T 式中，△ A470为反应时间内吸光度的变化； W为丹参叶片鲜重 (g)； t为反应时间 (min)； VT为提取酶液总体积 (ml)； VS为测定 时取用酶液体积 (ml)。 解 C 糖 =A453/ 103=(mol/L) CMDA+=(A532—A600)—(umol/L) 公式中 103为摩尔比吸收系数 C糖、 CMDA 分别是反应混合液中可溶性糖、 MDA 的浓度提取液中 MDA 浓度（ umol/ml)=(CMDA*反应液体积） /测定时提取液用量 1000MDA 含量（ umol/gfw） =提取液中 MDA 浓度提取液总量 /植物组织鲜重。 4 结果及分析 含水量的变化 由图 2 可 以看出，对照组的含水量基本没变化随着胁迫时间的增加，含水量的百分比逐渐降低。 且随 Pb2+浓度的增加而下降的越快；同等浓度的 Pb2+条件下，随着胁迫时间的增长，含水量的下降越明显。 由此可知： Pb2+对丹参叶片的保水能力有破坏，并且随着浓度的增加，。