花生网斑病病原鉴定及促进产孢实验毕_业_论_文(设计)总(编辑修改稿)

花生网斑病病原鉴定及促进产孢实验毕_业_论_文(设计)总(编辑修改稿)内容摘要：

的近球形，褐色，光滑，顶生或间生，单生或串生的厚垣孢子，厚垣孢子也可聚集成团。 对于该病原菌有性阶段的分类地位目前尚不明确，曾有报道为属于球腔菌属 Mycosphaerella、隔孢球壳属 Didymosphaeria或亚隔孢壳属 Didymella。 曾经有报道称，有性阶段的子囊壳呈深褐色，球状，有短嘴或无嘴，单生，直径为 65~154181。 m，埋生于寄主表皮下。 子囊呈柱状或棍棒状，多数子囊有 10 1 个分化的足胞，大小为 10~1735~60181。 m。 子囊孢子为椭圆形，大小为5~7~16181。 m，有 1个隔膜，光滑，透明至淡黄色，随着成熟而变暗。 但该阶段在病害侵染中不起作用 [1]。 参考文献： [1] 徐秀娟主编 . 中国花生病虫草鼠害 [M]. 北京 : 中国农业出版社 , 2020, 49. [2] 范文忠 , 程丽 , 李云江 . 不同碳源氮源对花生网斑病生长的影响 [J]. 安徽农业科学 , 2020, 39(26): 1602016021. [3] 孙晓会 . 花生主要病虫害及防治措施 [J]. 中国果菜 , 2020, (9): 1821. [4] 吴献忠 , 张卫 , 李荣花 , 等 . 花生网斑病研究进展 [J]. 莱阳农学院学报 , 2020, 17(4): 294297. [5] 傅俊范 , 杨凤艳 , 周如军 , 等 . 辽宁花生病虫发生危害及种类鉴定 [J], 植物保护 , 2020,39（ 1） : 144147. [6] 何健三 . 关于花生网纹污斑病的研究与讨论 [J]. 花生科技 , 1988（ 4） :1216. [7] 全鑫 , 宋玉立 , 何文兰 . 花生网斑病国内外研究进展 [J]. 河南农业科 , 2020(7):1316. [8] 王振跃 , 王守正 . 河南省花生网斑病的初步研究 [J]. 河南农业科技 , 1993,2(7):23 — 25. [9] 曹玉良 . 花生品种间关联性的研究 [J]. 花生科技 , 1998,1(4):l4. [10] 李君彦 , 李有志 , 焦锋 , 王翠芸 . 陕西省花生网斑病病原菌的 研究 [J]. 花生科技 , 1991, (1): 1~6. 三、研究方案 (研究内容、目标、研究方法、技术路线、拟解决的问题、特色或创新点等 ) 材料 材料 花生（品种为白沙 1016），玉米粉，琼脂， 燕麦片，蔗糖 ，马铃薯，葡萄糖等。 仪器 光照培养箱，立式压力蒸汽灭菌锅， Olympus 光学显微镜， LETCA ICC50 HD 11 摄像显微镜等。 花生网斑病病原菌的分离、纯化 对 2020 年田间发病的花生网斑病病叶进行分离、纯化。 分离纯化培养基 为马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ PDA），制作 步骤如下： （ 1) 根据培养基配方，计算好各种成分的量及要求配置的总量，分别秤取或量取 马铃薯 200g，琼脂 ，葡萄糖 ，加 自来水至 1000mL。 （ 2） 将马铃薯切成 1cm 边长的块状加入自来水中，文火煮沸后计时 30min （ 3） 趁热用四层纱布过滤，将滤液用蒸馏水定容至 1000mL。 （ 4） 再把培养基转移至锅内，加入琼脂 粉 ，在加热的过程中不断搅拌，待充分溶解后加入 葡萄糖， 并搅拌均匀。 （ 5） 分装，将配置好的培养基装入三角瓶，封口。 （ 6） 高压蒸汽灭菌。 121℃ 灭菌 20min。 病原菌的分离、纯化 （ 1） 分离试验开始前，将 PDA 培养基在微波炉中加热融化。 （ 2） 分离纯化实验要在超净工作台进行无菌操作，将所需物品按次放在工作台上，进行实验之前要提前打开紫外灯照射消毒 15min。 （ 3） 保证自身洁净，用肥皂洗净双手，再用 70%酒精擦手及所需工具。 （ 4） 在超净工作台上将冷却好的培养基倒入灭过菌的培养皿，形成 2~3mm 厚的平板，静置冷却使其凝固。 要在酒精灯火焰旁边操作，避免造成污染。 （ 5） 实验材料选择发病花生叶片上单个的网斑病斑，以减少杂菌污染。 用刀片在花生叶的病健交界处切取约 5mm 大小的组织块。 将组织块在酒精中浸泡 20s，取出后在 %升汞溶液里浸泡 2~3min 进行表面消毒，操作注意安全并且注意回收升汞。 再将组织块在无菌水中冲洗 3 次，将组织块用镊子捣碎，接种时尽量使用小的组织块。 用无菌操作法将病组织接种到培养皿上，每皿接种 2~3 块，均匀分布在皿中。 盖上皿盖，用保鲜膜封口，倒置在 25℃恒温培养箱中，培养 3~4 天左右，观察待分离菌生长情况。 分离、纯化后得到两种纯培养物，经对二者进行致病性测定，发现均可使离体花生叶片致病，且致病后症状相同，将其分别编号为 A、 B。 12 不同培 养条件对花生网斑病菌产孢的影响 培养基的制备 选用 3 种产孢培养基，分别为 玉米培养基 、燕麦培养基和花生叶汁培养基（自制）。 （ 1） 玉米培养基的 制备 1）根据培养基配方，计算好各种成分的量及要求配置的总量，分别秤取或量取玉米粉 ，琼脂粉 ，加自来水至 1000mL。 2）在锅内加入一定量的自来水煮沸，再加入 100g 玉米粉，搅拌均匀， 文火煮沸后计时 1h。 3）趁热用四层纱布过滤，将滤液用自来水定容至 1000 mL。 4）再把滤液转移至锅内，加入琼脂粉，加热过程中不断搅拌至充分溶解。 5）用 1mol/LNaOH 或 1mol/L 的 HCl 调节 pH 值至。 6）分装，将配置好的培养基装入三角瓶，封口。 7）高压蒸汽灭菌， 121℃ 灭菌 20min。 （ 2）燕麦培养基的制备 1） 根据培养基配方，计算好各种成分的量及要求配置的总量，分别秤取或量取 燕麦片 30g，琼脂粉 12g，加自来水至 1000 mL。 2） 在锅内加入 1000 mL 自来水煮沸，再加入 30g 燕麦片，搅拌均匀， 文火煮沸后计时 1h。 3） 趁热用四层纱布过滤，将滤液用自来水定容至 1000 mL。 4） 再把滤液转移至锅内，加入琼脂粉并不 断搅拌至琼脂溶化。 5） 用 1mol/LNaOH 或 1mol/L 的 HCl 调节 pH 值至 6） 分装，将配置好的培养基装入三角瓶，封口。 7） 高压蒸汽灭菌， 121℃ 灭菌 20min。 备用 （ 3） 花生叶汁 培养基的制备 1）根据培养基配方，计算好各种成分的量及要求配置的总量，分别秤取或量取 花生叶 ，马铃薯 200g，琼脂 12g，葡萄糖 20g， 自来水定容至 1000 mL。 2） 将马铃薯切成 1cm 边长的块状和洗净的花生叶片一起加入蒸馏水中，文 13 火煮沸后计时 30min。 3）趁热用四层纱布过滤，将滤液用蒸馏水定 容至 1000 mL。 4）再把滤液转移至锅内，加入琼脂粉，不停地搅拌，直至溶化。 5）再用 1mol/LNaOH 或 1mol/L 的 HCl 调节 pH 值至。 6）分装，将配置好的培养基装入三角瓶，封口。 7）高压蒸汽灭菌， 121℃ 灭菌 20min。 培养条件设计 培养条件有三种，分别是光暗交替（ 12h/12h），黑暗，近紫外光，均置于 25℃恒温培养箱培养。 病原菌产孢培养试验设计 A 和 B 两种病原菌的产孢培养方案如下表： 表 1 网斑病病原菌诱发产孢培养试验设计 光暗交替（ 12h/12h） 黑暗条件 近紫外光条件 玉米琼脂培养基 （ 1） （ 2） （ 3） （ 1）。