纤维素酶辅助提取仙鹤草中总黄酮的研究毕业论文(编辑修改稿)

纤维素酶辅助提取仙鹤草中总黄酮的研究毕业论文(编辑修改稿)内容摘要：

solution pH value 5, enzyme concentration / mL. Under this condition, agrimony total flavone extraction rate in up to %. . Keywords： Cellulase。 Cranes。 Total flavones。 Fxtraction 楚雄师范学院本科论文（设计） 1 纤维素酶辅助提取仙鹤草中总黄酮的研究 前言 黄酮类化合物 (flavonoids) 又称黄酮体、黄碱素 ， 是一类具有 2苯基色原酮 (2 Ophenyl Ochromone) 结构、以游离态或 以 糖苷形式存在的化合物。 植物黄酮类化合物是从植物中提取和分离出来 的一类天然物质，其生物活性强、毒副作用小，并有抗癌、抗衰老、抗炎、降血糖、降血压、调节内分泌等多种功能，是一类具有广泛开发前景的天然抗氧化剂 [1]。 据文献报道，从植物中提取黄酮类化合物的方法主要有醇提法、碱提法、超声波振荡提取法等方法 [2]。 仙鹤草 (Agrimonia pilosa Ledeb)，又名脱力草、龙牙草，为蔷薇科多年植物，野生于我国各地。 据文献报道，仙鹤草具有明显的抗肿瘤作用 ， 同时可以增强免疫功能 [3]。 其主要有效成分为仙鹤草多酚和黄酮类成分 [46]。 另外，仙鹤草中黄酮类成分芦丁、槲皮素、 山奈酚等具有显著的抑制乙酰胆碱酯酶、抗炎活性。 因此研究仙鹤草黄酮化合物的提取工艺对仙鹤草的深入开发利用具有重要的意义。 据文献报道，方桂珍 [7]、陈优生 [8]等人采用醇提法提取过仙鹤草中的黄酮 类化合物 ，蒋志华 [9]等 采用 超声波法提取过仙鹤草中的黄酮 类化合物 ，朱立俏、盛华刚 [10]采用 大孔树脂法提取过仙鹤草中 的黄酮类化合物 ，但是尚未有人采用过 酶解 醇提 法提取 过 仙鹤草中 的 总黄酮。 本课题选用仙鹤草为原料， 采用酶解 醇提法 从仙鹤草中提取总黄酮，得出最佳提取条件，以芦丁为对照 测 定仙鹤草 提取液 中总黄酮的 含量 ， 计算仙鹤草 中总黄酮的 提取率， 课题的完成可为仙鹤草中总黄酮的提取提供一定参考。 楚雄师范学院本科论文（设计） 2 1 实验部分 原料、仪器和试剂 原料 仙鹤草 （采自 云南大姚 ）。 试剂 纤维素酶（上海埃博商贸有限公司，规格 30u/mg） ； 芦丁标准品（日本和光纯药工业株式会社） ；亚硝酸钠 ； 硝酸铝 ； 氢氧化钠 ； 无水醋酸钠 ； 冰醋酸 ； 无水乙醇等均为分析纯 ， 精密 pH 试纸。 仪器 722 型光栅分光光度计（山东高密分析仪器厂） ； HHS2S 恒温水浴锅（金坛市大地自动化仪器厂） ； CP214C 电子天平（奥豪斯 仪器有限公司制造） ； 摇摆式植物粉碎机。 实验方法 原料处理 仙鹤草 采集 → 洗净 → 阴干 → 粉碎 → 备用。 黄酮的提取 称取 仙鹤草 粉 ， 置于 150ml的锥形瓶中 ， 加入 一定 pH 值的 HAcNaAc 缓冲溶液，加入一定用量的纤维素酶，摇匀 并盖上锥形瓶塞 后置于一定温度下酶解 ， 一段时间后加入 70%乙醇， 在 50℃ 下恒温浸提 2h 后 ，过滤、洗涤，合并滤液， 定容 于 50mL 容量瓶中，得 提取 液。 黄酮的定性鉴定 [11] 铝盐反应：取提取液 于试管中，加入几滴 1%硝酸铝溶液，振荡。 如果溶液颜色显黄色，则说明提取液中含有黄酮。 氢氧化钠反应： 取提取液 于试管中，加入几滴 4%氢氧化钠 溶液，振荡。 如果溶液颜色显亮黄色，则说明提取液中含有黄酮。 浓硫酸反应：取提取液 于试管中，加入几滴 浓硫酸 溶液，振荡。 如果溶液颜色显橙黄色，则说明提取液中含有黄酮。 铁离子反应：取提取液 于试管中，加入几滴 5%三氯化铁 溶液，振荡。 如果溶液颜色显楚雄师范学院本科论文（设计） 3 墨绿色，则说明提取液中含有黄酮。 浓氨水反应：取提取液 于试管中，加入几滴浓氨水溶液，振荡。 如果溶液颜色显黄色 ，则说明提取液中含有黄酮。 盐酸 — 锌粉反应：取提取液 于试管中，先加入少量的锌粉，再加入几滴浓盐酸，振荡。 如果溶液颜色显橙红色，则说明提取液中含有黄酮。 仙鹤草 中总黄酮提取率的计算 芦丁标准溶液的配制 准确称取 120℃ 下干燥至恒重的芦丁 10 mg，用 70%乙醇溶解后定容至 50mL，得浓度为。 测定方法依据 以芦丁标准液为对照品测定 仙鹤草 提取液 中 总 黄酮的 提取率 ，加入亚硝酸钠溶液、硝酸铝溶液、氢氧化钠溶液，在碱性条件下使黄酮与铝盐形 成 有色 络合物，在可见光区获得稳定的特征吸收峰。 测定波长的选择 [12] 准确吸取 的芦丁标准液于 25mL比色管中，加 5% NaNO2 溶液 ，混匀，放置 6min；加 10% Al (NO3)3溶液 ，混匀， 放置 6min；加 4%NaOH 溶液 ，再加 70%的乙醇定容至 10mL 刻度线，摇匀， 放置 10min。 以试剂空白作参比，在 440～ 560nm 之间测定络合物吸光度，确定最大吸收峰波长（此后的吸光度均在此最大波长下测定）。 标准曲线的绘制 准确吸取 ， ， ， ， ， ， 分别置于 25mL比色管中， 各加 5%的 NaNO2 溶液 ， 摇匀，放置 6min， 加 10%的 Al (NO3)3溶液 ，摇匀，放置 6min，加 4%的 NaOH 溶液 ，摇匀，用 70%乙醇定容至 10mL 刻度线，摇匀，放置 10min 后，以试剂空白为参比，在最大 吸收 波长 510nm 处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，芦丁标准液浓度为横坐标，绘制标准曲线 ，得回归方程。 提取液中总黄酮含量的测定 量取提取液 ，定容于 50mL 容量瓶中，按 操作方法显色后，在最大吸收波长处测定出试液的吸光度，根据回归方程，测定出提取液中总黄酮的含量，并计算出仙鹤草中总黄酮的提取率。 仙鹤草中总黄酮提取率的计算 [14] 根据 操作得出的线性回归方程，计算仙鹤草总黄酮的提取率如下： 楚雄师范学院本科论文（设计） 4 仙鹤草提取液中黄酮的浓度 C(g/mL)=(A+) / （ 1） 仙鹤草提取液中总黄酮提取率（ %） = % （ 2） 式中： C 为仙鹤 草 提取液中黄酮的浓度； V1 为提取液的体积 50mL ； V2 为从提取液中取出的体积 ； M 为仙鹤草粉的质量。 单因素实验 酶解温度对 仙鹤草 总 黄酮 提取率 的影响 加入 纤维素酶使其浓度为 ，分别 在 40℃ 、 45℃ 、 50℃ 、 55℃ 、 60℃ 下 酶解 ，按 的 方法操作 ，得提取液， 按 操作方法显色后，测定出试液的吸光度， 平行实验三次，根据回归 方程， 计算总黄酮提取率。 酶解时间对 仙鹤草总 黄酮 提取 率的影响 在 选出的适宜纤维素酶解温度下分别酶解 、 、 、 、 ，按 的方法操作，得提取液，按 操作方法显色后，测定吸光度的值，平行实验三次，并计算总黄酮提取率。 溶液酸碱性对 对仙鹤草总 黄酮 提取 率 的影响 分别加入 pH 为 、 、 、 、 的 HAcNaAc 缓冲溶液，在 、 选出的适宜纤维素 酶解温度、酶解时间下 ，按 的 方法操作，得提取液，按 操作方法显色后，测定吸光度的值，平行实验三次，并求出黄酮提取率。 酶浓度对仙鹤草总黄酮提取 率 的影响 加入不同用量的纤维素酶使其浓度分。