正交设计优化蛹虫草液体菌种培养基的研究(编辑修改稿)

正交设计优化蛹虫草液体菌种培养基的研究(编辑修改稿)内容摘要：

烘干和称重的培养皿上。 菌丝体干重的测定 [13] 先将烘干的平板称取重量 mL，将分离出的菌丝体放入平板中，于干燥箱中进行烘干，起始温度为 35 ℃ ，每隔 1 h升高 5 ℃ ，最高温度 不超过 50 ℃。 烘干过程中每隔 4 h翻动 1次，烘至恒重，冷却称重，记为 m2并按照下述公式 计算 菌丝体干重。 菌丝体干 重（ g/100 mL） = m2（ g） m1（ g） 液体培养基最佳配方的筛选试验 根据碳、氮源单因素筛选试 验结果和菌丝球大小及数量的测定结果，以选出的最 适 葡萄糖浓度和氮源蛋白胨浓度以及无机盐 KH2PO4和 MgSO4为试验因素，设计 L9 （ 34）正交试验 ， 正交试验因素及水平见表 3，配制 9种培养基，每组试验 设 3次重复。 以菌丝生物量为检测指标，取平均值，筛选出蛹虫草菌种液体培养基最 适 配方。 表 3 L9（ 34）正交试验因素及水平 水平 因素 A/葡萄糖 B/蛋白胨 C/ MgSO4（ g/L） D/KH2PO4(g/L) 1 1 1 6 2 2 2 3 3 3 2 结果与分析 不同碳氮源浓度对蛹虫草菌丝球大小及数量的影响 不同浓度梯度碳源培养结果 振荡培养 5 d后，蛹虫草在不同葡萄糖浓度的培养基上的培养结果见 表 4和图1。 在培养过程中， 随 着 振荡培养时间的延 长 菌丝球数量 逐渐 增多。 表 4 不同培养液中菌丝球形态、大小及数量的比较 葡萄糖浓度 发酵液颜色 菌丝球 边缘整齐度 菌丝球大小 （ mm） 菌丝球数量 （个 /3 mL） C1 无色 不整齐 14 C2 白色 不整齐 31 C3 微 黄 整齐 47 C4 淡黄 整齐 87 C5 淡黄 整齐 139 C6 淡黄 整齐 113 C7 黄 色 整齐 72 C8 黄 色 整齐 60 C9 深 黄 不整齐 41 从表 4和图 1可以看出 ，在碳源 试验中， 当 葡萄糖浓度为 20 g/L（ C5）时 ，菌丝球大小均匀 ， 体积小而数量多 ，这样的 液体菌种， 在接种后生长点多 ，这是衡量液体菌种优良性状的重要标志之一；而 当 葡萄糖浓度为 0 g/L（ C1）时 ， 菌丝球 数量太少且边缘 不 整齐， 当葡萄糖浓度为 5 g/L（ C2）时 ，菌丝球体积太大，数量少， 当 葡萄糖浓度为 40 g/L（ C9）时 ，菌丝球大小 参差不齐 而且数量少， 其他处理菌丝球数量也较少， 它们都不适合做液体 菌种。 综合菌丝球的数量和 菌丝球 直径， 当 葡萄糖浓度为 20 g/L（ C5）时 ， 培养获得的液体菌种质量最优。 不同浓度梯度氮源培养结果及分析。 振荡培养 5 d的液体菌种，观测结果见表 5和图 2。 表 5 不同培养液中菌丝球形态、大小及数量的比较 图 1 不同浓 度的葡萄糖 对蛹虫草菌丝生长的影响 C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 7 蛋白胨浓度 发酵液颜色 边缘整齐度 菌丝球大小 （ mm） 菌丝球数量 (个 /3 mL) N1 无色 不整齐 36 N 2 乳白 不整齐 29 N 3 白色 整齐 53 N 4 微 黄 整齐 60 N 5 淡黄 不整齐 67 N 6 黄 色 整齐 129 N 7 黄 色 整齐 136 N 8 黄 色 整齐 149 N 9 深 黄 不整齐 107 从表 5和图 2可见 ， 在 氮 源 试验 中，以蛋白胨为氮源的浓度的菌种， 从菌丝球数量来看，蛋白胨 浓度 从 0 g/L（ N1）14 g/L（ N8） ,菌丝球数量基本呈递增关系。 而当蛋白胨 浓度 为 16 g/L（ N9）时菌丝球数量反而减少。 从菌丝球大小来看，蛋白胨 浓度 为 0 g/L（ N1）、 10 g/L（ N6）、 12 g/L（ N7）、 14 g/L（ N8）时菌丝球体积较小且大小均匀。 而其他处理菌丝球大小不均，故 它们都不适合做液体 菌种。 因此， 综合 考虑 菌丝球的数量和直径以及菌种形态，以 蛋白胨 浓度 为10 g/L（ N6）、 12 g/L（ N7）、 14 g/L（ N8）时的 液体菌种 较好。 不同碳氮源浓度对蛹虫草菌丝球干重的影响 不同碳源浓度对蛹虫草菌丝干重的影响 众所周知，生命的 基本单元 氨基酸、核苷酸是以碳元素做骨架变化而来的。 可以说，没有碳，就没有生命。 碳 元素 ，是生命世界的栋梁之材 ，是构成细胞结构最重要结构元素。 碳源不仅是食用菌合成菌体细胞的必不可少的原料，而且为微生物生长、物质合成提供能量。 不同碳源浓度对蛹虫草菌丝干重的影响试验结果见图 3。 010 1 2 3 4葡萄糖浓度（ g/100m L ）菌丝体干重（g/100mL）菌丝体干重图 2 不同浓 度的蛋白胨 对蛹虫草菌丝生长的影响 N1 N2 N3 N6 N4 N7 N9 N8 N5 8 从图 3 可以看 出 ，当 培养基 中 葡萄糖 浓度为 0 ~20 g/L时 ，在此范围内 ， 菌丝 体干重 随着 葡萄糖浓度提高 而 逐渐提高， 呈递增关系 ； 当葡萄糖浓度为 20 g/L时，菌丝体干重得率最高。