高效液相色谱分析法hplc(编辑修改稿)

高效液相色谱分析法hplc(编辑修改稿)内容摘要：

也相似 • 氨基键合相与硅胶性质差别大 ， 碱性 分析极性大物质 、 糖类等 1．反相离子对色谱法（ IPC或 PIC） 反相色谱中 ， 在极性流动相中加入离子对试剂 ， 使被测组分 与其中的反离子形成中性离子对 ， 增加 k和 tR， 以改善分离 1） 离子对试剂：烷基磺酸钠 → 分析碱 四丁基季胺盐 → 分析酸 2） 影响 k的因素 a． 与 m的极性有关 （ 同反相色谱 ） b． 与 R的链长有关： R↑ 长 ， 极性 ↓ 小 ， tR↑ ， k↑ 3） 适用：较强的有机酸 、 碱  三、离子色谱法（ IC） 2．反相离子抑制色谱 在反相色谱中 ， 通过加入缓冲溶液调节流动相 pH值 ， 抑制 组分解离 ， 增加其 k和 tR， 以达到改善分离的目的 1） 离子抑制剂：弱酸 、 弱碱性物质 pH一定的缓冲溶液 2） k的影响因素： 与流动相极性有关 ， 还与 pH值有关  选择流动相：应同时考虑极性及 pH值 酸性物质 —— 加入酸 HAc tR↑ ， k↑ 碱性物质 —— 加入碱 NH3H2O tR↑ ， k↑  调节 pH范围： ~ pH 破坏键合相与载体的结合 pH 腐蚀柱子 3） 适用：极弱酸碱物质 pH=3~7弱酸； pH=7~8弱碱；两性化合物 2． 对流动相的要求： 1） 与固定液不反应 2） 对样品有良好溶解度 k=1~10 k=2~5 最理想的 3） 与检测器匹配： UV（ 常用 ， 测定波长应大于溶剂的截止波长 ） 荧光 ， 电化学 4） 使用粘度小 、 纯度高的流动相 （ 甲醇 ， 乙腈 ） 使用前过滤 、 脱气 3．洗脱方式 1） 等度洗脱 （ 恒组成溶剂洗脱 ） 以固定配比的溶剂系统洗脱组分 （ 一个泵 ） 类似 GC的等温度洗脱 2） 梯度洗脱： 在一定分析周期内不断变换流动相的种类 和比例 即不断改变其极性 （ 两个泵 ） 适于分析极性差别较大的复杂组分 类似 GC的程序升温 （ 沸程较长样品 ） 167。 24 高效液相色谱仪 1． 泵： 恒压泵：流量精度不稳 恒流泵：常用 2． 进样装置 1） 隔膜进样 （ 高分子有机硅胶垫 → 进样室 ） GC系统压力较小 ， 可以 HPLC系统压力太大 ， 必须停泵进样 （ 早期 ） 2） 阀进样：不必停泵 ， 六通阀 液相色谱 3． 色谱柱：直径 4~6mm,柱长 10~30cm 柱效评价：色谱系统适应性试验 R， n， fs（ 拖尾因子 ） 柱再生：维护 、 保养 、 柱子的冲洗 4． 检测器 1） 紫外检测器：适于吸收紫外光的物质 2） 荧光检测器：只能分析自身发光的物质 灵敏度高 3） 示差折光检测器：利用折光率的差别 灵敏度低 ， 温度要求严格 4） 电化学检测器 5） 化学发光 第四章 电位分析法 (Potentiometry) 167。 41 电化学分析法概述 一、电化学分析 ( electrochemical analysis ) 根据物质在溶液中的 电化学性质及其变化 来进行分析的方法称电化学分析。 它是以溶液 电导、电位、电流和电量 等电化学参数与被测物质含量之间的关系作为计量基础。 电化学分析方法主要有下面几类： ： 测定 电阻 参量 ： 测定 电压 参量 ： 测定 电量 参量 ： 测定 电流 时间 参量 ： 测定 电压 电流 参量 二、电化学电池 ( electrochemical cell ) 它是由一对电极、电解质和外电路三部分组成，它常分为原电池和电解池两类。 原电池（ primary cell）： 自发的将电池内部进行的 化学反应所产生的能量转化成电能的化学电池。 电解池（ electrolytic cell）： 实现电化学反应的能量由外电源供给的化学电池，它是将 电能转变为化学能。 三、电池的电动势 ( E电池 ) 电池的电动势：是指当流过电池的电流为零或接近于零时两极间的电位差。 其中 E 0’ 代表氧化或还原半反应的电极电位、 Δ E相间电位 代表电池中的液接电位（来源于浓度差或盐桥）和膜电位。 相间电位负极正极电池 EEEE  00 四、电极上半反应的电极电位（ E ’ ) 电池中发生的反应是氧化还原反应，根据物理化学知识可知总反应常用氧化半反应和还原半反应来表示。 电极上每个半反应的还原电极电位 （ E ’ )与反应型体活度的关系由能斯特方程（ Nernst equation ）表示： 若某一电极上半反应的方程式为： Ox + ne Red 则其电极电位为 aadReOxlnnFRTEE   五、电极的类型 基于电子交换反应的电极 (1) 第一类电极： M n+/M (2) 第二类电极： M/MX（固体） (3) 第三类电极： M/MX (s)。