标记免疫技术(编辑修改稿)

标记免疫技术(编辑修改稿)内容摘要：

鲜明。 ④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质，与蛋白质的结合物稳定，易于保存。 ⑤标记方法简单、安全无毒。 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 荧光抗体是将荧光素（如 FITC）与特异性抗体以化学方式共价结合而成。 标记方法：搅拌法 (适合大样品 ) 透析法 (适合小样品 ) 标记抗体的纯化：透析法 层析分离法 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 荧光抗体的鉴定 F/P比率 ： 将制备的荧光抗体稀释至 A280≈ ，分别测读 A280（蛋白质特异吸收峰）和标记荧光素的特异吸收峰 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 F/P值越高，说明抗体分子上结合的荧光素越多，反之则越少。 一般用于固定标本的荧光抗体以 F/P＝ ，用于活细胞染色的以 F/P＝。 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 抗体效价 ：效价越大标记抗体的特异性越高非特异荧光越少。 效价在 1:161:32者较为理想 抗体特异性 ：免疫电泳和交叉免疫电泳观察特异性沉淀线或沉淀峰，在紫外线照射下发出强烈荧光 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 第二节 免疫荧光显微技术 基本原理 ：使荧光抗体与标本切片中组织或细胞表面的抗原进行反应，洗涤除去游离的荧光抗体后，于荧光显微镜下观察，在黑暗背景上可见明亮的特异荧光。 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 直接法 荧光抗体染色 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 直接法 优点：操作简便、特异性高、非特异 荧光染色因素少， 缺点：灵敏度偏低，每检查一种抗原需制备相应的特异荧光抗体 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 间接 法 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 间接法 优点：灵敏度高，在不同抗原的检测中只需应用一种荧光抗体。 既可检测抗原，也可检测抗体。 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 免疫荧光技术在医学检验中的应用  在细菌学检验中主要用于菌种的鉴定。  免疫荧光用于梅毒螺旋体抗体的检测是梅毒特异性诊断常用方法之一。  用荧光抗体染色法可检出病毒及其繁殖情况。  在寄生虫感染诊断中，间接免疫荧光试验（ IFAT）是当前公认的最有效的检测疟疾抗体的方法。 免疫学及免疫学检验 来自 库下载  免疫荧光法还是检测自身抗体的好工具，在自身免疫病的实验诊断中应用广泛。 其突出优点是能以简单方法同时检测抗体和与抗体起特异反应的组织成分，并能在同一组织中同时检查抗不同组织成分的抗体。  荧光抗体技术的一种特殊应用是流式细胞分析（ flowcytometry）。 可用于检测细胞大小、折散率、粘滞度等，更常用于 T细胞亚群等的检测。 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 第十章 酶免疫技术 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 第一节 酶免疫技术概述 基本原理 利用酶催化底物反应的生物放大作用 ,提高特异性抗原 抗体免疫学反应的检测敏感性的一种标记免疫技术。 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 基本特点： ①标记后保留酶和抗原 (抗体 )的活性 ②酶促反应专一性，保证特异性 ③底物反应放大作用，提高敏感性 ④酶标试剂保存稳定 ⑤操作简便，安全易行 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 主要试剂的制备与要求 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 一、酶与酶作用底物 （一）用于标记酶的要求：  酶活性高  标记后酶活性稳定，且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性  酶催化底物后信号易判定或测定  酶活性不受样品中其他成分的影响  酶、辅助因子及底物理化性质稳定，安全无害，价廉 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 （二）常用酶及其底物 （ HRP） 常用底物：  邻苯二胺（ OPD）：反应显橙黄色，应避光，致癌性  四甲基联苯胺（ TMB）：反应后呈蓝色，无需避光，无致癌性，但水溶性差。 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 2. 碱性磷酸酶（ AP） 常用底物为对硝基苯磷酸酯（ pNPP），产物为黄色。 * AP灵敏性高与 HRP，但不易获得纯品，稳定性及酶标记物收率 低于 HRP，且价高，故应用不如 HRP普及。 免疫学及免疫学检验 来自 库下载 二、酶标。