高粱木质素突变株b743生物学特性分析(编辑修改稿)

高粱木质素突变株b743生物学特性分析(编辑修改稿)内容摘要：

质量； 106— 样品质量单位由 g换算成 μg的倍数； 图 1， 葡萄糖标准曲线 , Glucose curve of starch 蛋白质含量的测定 本实验通过紫外吸收法 [7]。 蛋白质溶液在 280nm的光吸收值与肽键含量成正比。 核酸对紫外也有吸收，但其最大吸收 峰在 260nm波长处，故可通过校正加以消除。 称取烘干、粉碎的高粱种子 ，放入研钵中，加入 30%NaOH溶液及少量石英砂研磨 2min，再加入 60%碱性乙醇溶液研磨 5min。 然后用 60%碱性乙醇溶液将研磨好的样品全部转入 25mL容量瓶中定容。 摇匀后静置片刻，再取部分提取液离心10min(3500r∕min)。 吸取离心后的上清液 25mL容量瓶中，用 60%碱性乙醇溶液定容，摇匀后即可用于测定。 取适量稀释后蛋白质提取液，在紫外光分光光度计上， 以 1 cm光径的石英比色 杯 分别 在 280nm和 260nm波长条件下（ 空白对照为 样品提取液）测定其光吸收值，然后根据所测得的光吸收值，代入公式计算出样品中蛋白质的含量。 样品中的蛋白质浓度 (mg/mL)=A260 样品中蛋白质含量 (%)=(A260)稀释倍数 100/1000 式中： ； A280为蛋白质提取液在 280nm波长处的吸光度值； A260 5 为蛋白质提取液在 260nm波长处的吸光度值； 100/1000为蛋白质浓度换成成百分数。 种子蛋 白质组分的分析 利用不同性质的蛋白溶解在不同的提取液中，再通过紫外吸收法测定各类蛋白含量[7]。 清蛋白的提取 [7] 取 1g烘干的高粱种子，研磨成细分，放入 25mL具塞磨口三角烧瓶，加 10mL蒸馏水放入 THZC恒温振荡器提取 2h后静置 ， 4000r/min，取其上清液，将残渣合并于原三角瓶中， 再 分别用 50mL和 30mL蒸馏水重复振荡 后 离心，合并上清液， 合并 剩余残渣于原三角瓶中。 球蛋白的提取 [7] 在三角瓶中，加 100mL ，放于 THZC恒温振荡器上振荡提取 2h后静置 ， 4000r/min，取其上清液，残渣合并于原三角瓶中，在分别用50mL和 30mL ，合并上清液， 合并 剩余残渣于原三角瓶中。 醇蛋白的提取 [7] 在三角瓶中，加 100mL 70%乙醇溶液，放于 THZC恒温振荡器上振荡提取 2h后静置 ， 4000r/min，取其上清液， 残渣合并于原三角瓶中，在分别用 50mL和 30mL 70%乙醇重复振荡提取离心，合并上清液， 合并 剩余残渣于原三角瓶中。 谷蛋白的提取 [7]在三角瓶中，加 100mL 70%乙醇溶液，放于 THZC恒温振荡器上振荡提取 2h后静置 ， 4000r/min，取其上清液， 合并 残渣于原三角瓶中，在分别用 50mL和 30mL ，合并上清液。 用蒸馏水 将上述四组离心后的上清液定容至 250mL，用各自 提取液作对照 用 TU1810紫外可见光光度计 ，分别在 280nm和 260nm波长 下测定其吸收值。 按下面公式计算样品中蛋白质浓度 ： 样品中的蛋白质浓度 (mg/mL)=A260 样品中蛋白质含量 (%)=(A260)稀释倍数 100/1000 式中： ； A280为蛋白质提取液在 280nm波长处的吸光度值； A260为蛋白质提取液在 260nm波长处的吸光度值； 100/1000为蛋白质浓度换成成百分数。 淀粉含量测定 高氯酸水解 蒽酮比色法 [8]测定淀粉含量。 用乙醇溶液 除去 样品中的可溶性糖，再用高氯酸溶液溶解残留物中的淀粉，使淀粉与其他成分分离，在浓硫酸的作用下， 淀粉与蒽酮反应生成蓝绿色化合物，在 640 nm 波长下测定 吸光度。 试剂配制： 52％高氯酸溶液； 80％乙醇溶液；蒽酮试剂 （ 将 100mL 88％硫酸溶液中，现用现配 ） ；淀粉标准液 （ 将 200mg淀粉倒入 100mL烧杯中，加入 5mL蒸馏水，加入 65 mL52％高氯酸溶液，搅拌溶解，加水定容 至 100mL，浓度 2mg／ mL；取上述标准淀粉溶液 250mL， 即 为 80ug／ mL）。 标准曲线： 取洁净 试管，分别加入 、 、 、 、 、 ug 淀粉标准液，每一个浓度 2个重复，加 蒸馏 水 使 各试管均为 mL， 冰水中冷却 2 min，加入 mL蒽酮 试剂 ，摇匀， 置 冰水中冷却 2 min。 再置 沸水中 水浴 5 min，取出试管， 自然 冷却至室温。 用 mL 蒸馏水按照上述操作作为空白参比，于 640nm 波长下比色，测定各试管溶液的吸光度。 以吸光度为横坐标，淀粉浓度为纵坐标，绘制 标准 曲线，进行曲线拟合。 操作步骤：称取研碎的子粒粉末 10 mL离心管中，其中包括 2个重复， 加 2滴80％乙醇溶液使样品湿润，再加 1 mL 水摇匀，加入 5 mL 热的 80％乙醇溶液 ， 摇匀后静置 5min后， 3000r/min离心 5 min， 倾出上清液 . 再用 6mL 80％乙醇溶液重复提取 1次。 向上述残 留物中加入 5 mL水和 6mL 52％高氯酸溶液， 振荡 10 min，以 3000r/min离心 10min，将上清液转入 20 mL 溶量瓶中，残留物再用 7 mL 52％高氯酸溶液提取，合并提取液 ， 6 过滤，弃去最初 mL 滤液。 吸取 mL滤液加水定容 25mL溶量瓶中，取上述淀粉提取液 mL在 640 nm 波长下 吸光度。 y = R2 = 01020304050607080900 吸光度 OD浓度（ug/ml） 图 2， 淀粉标准曲线 , Standard curve of starch 叶绿素（ Chl）含量测定 本实验采用丙酮提取分光光度法测定 [7]。 称新鲜高 粱叶片，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉）混匀。 称取 去中脉后 剪碎的新鲜 叶片 ， 共三份，在这里仍然是每组浓度下三个重复，并不能缺少对照组，分别放入研钵中，加少量 碳酸钙粉和 石英砂及 23mL80%丙酮研成浆状，再加 80%丙酮 10mL继续研磨至组织变白。 静置 35min。 取 一张 滤纸，置于漏斗中，用丙酮润湿，沿着玻璃棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25mL棕色容量瓶中，用少量 80%丙酮冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。 用滴管吸取丙酮，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。 直至滤纸和残渣中 无绿色为止。 最后用丙酮定容至 25mL。 分批提取叶绿素，把叶绿体色素提取液倒入光径 1cm的比色杯内。 以 95%丙酮作对照，用分光光度计测定 665nm和 649nm下的吸光度 [7]。 按下列公式求出叶绿素浓度： Ca= Cb= 叶绿素总浓度 C=Ca+Cb 求得叶绿素总浓度后按下列公式计算叶绿素的含量： 叶绿素含量 (mg/g)=CVN103/W 式中： C为叶绿素浓度 (mg/L)； V为提取液体积 (mL)； N为稀释倍数；。