茶多糖提取工艺的优化(编辑修改稿)

茶多糖提取工艺的优化(编辑修改稿)内容摘要：

%。 当浸提温度较低时，溶质的渗透能力和溶解能 力较低，不利于多糖浸出，从而导致多糖的提取率较低。 茶多糖的热稳定性较差，当浸提温度过高时，其中部分成分使大分子多糖的糖苷键断裂造成多糖的部分损失。 王秀萍等 [20]的单因素试验表明， 70 80176。 C 的浸提温度有利于各茶样中茶多糖的提取及其活性的发挥，温度过高茶多糖的提取率反而下降。 孙秋香等 [21]的单因素试验也表明茶多糖的产量在 60 70%时较高，而并非温度越高越好。 据日本蓑和田博士的专利记载 ， 85176。 C 以上热水浸提可破坏茶多糖中降血糖的有效成分，故茶多糖提取温度不应超过 85176。 C。 浸提时间影响因 子的讨论 茶多糖的浸出量一般与浸提时间成正比，但扩散达平衡后，时间即不起作用。 达平衡的时间与溶剂体积、浸提温度有关。 浸提时间过短，多糖不能被充分提取；浸提时间过长则可能使多糖在长时间的高温作用下发生裂解、氧化而使提取率下降。 李碧婵等 [22]的研究表明，在开始一段时间，茶多糖的得率随浸提时间的增加而增加， 60 min 以后，随浸提时间的增加，茶多糖产率下降。 黄杰等[23]的单因素试验中，茶多糖的提取率随浸提时间的延长而增加，并没有出现产率下降的现象，这可能与其选择的浸提温度较低有关。 乙醇浓度影响因子的讨 论 乙醇沉淀多糖的主要原理是通过降低水溶液的介电常数使多糖脱水从而产生沉淀来分离多糖，几乎适用于所有水溶性多糖。 虽然不同多糖可在不同浓度乙醇的条件下分步沉淀，但从机理可知，乙醇浓度越高，多糖的沉淀率就会越高。 由单因素实验可知，在乙醇浓度为 45% 75%水平，随浓度的增加，茶多糖的提取率迅速上升，但从 75% 95%，茶多糖的提取率呈现平台趋势，基本没有多大变化，所以提取茶多糖的乙醇浓度宜采用 75%。 5 结论 通过以上分析，我们得到的主要结论为：综合单因素实验和正交设计实验，可知 pH值为 4时，茶多糖的提取率较高；由实验数据与分析得知，浸提温度为 85176。 C 时，茶多糖的提取率最佳；对浸提时间进行单因素分析， 时提取率高，但正交试验分析 ，综合分析浸提时间对茶多糖提取的作用机理，我们认为浸提时间宜采用 ；乙醇浓度单因素实验和正交试验分析均显示乙醇浓度 75%时，提取率比较高。 所以综上所述，茶多糖提取工艺的最佳条件组合 A1B3C2D2，即最佳 第 34 页 工艺条件为 pH值为 浸提温度为 85176。 C、浸提时间为 、乙醇浓度为 75%。 在对茶多糖的含量测定中，通过重现性实验，我们得到茶叶中茶 多糖的平均含量为 %，稳定性实验测定表明，茶多糖含量测定的有较好的稳定性。 参考文献 [1] 王元凤 ,金征宇 .茶叶中多糖的分离及降血糖活性的研究 [J].中草药 ,2020,36(10):14531457. [2] 王丁刚 ,王淑如 .茶叶多糖的分离、纯化、分析及降血脂作用 [J].中国药科大学学报 ,1991,22 (4):225228. [3] 侯仰锋 ,汪东风 ,周小玲等 .茶多糖对高脂血症大鼠血脂及肝脏中微量元素的调节作用 [J].营养学报 ,2020,30(3):269272. [4] 王丁刚 ,王淑如 .茶叶多糖心血管系统的部分药理作用 [J].茶叶 .1991 年 02 期 . [5] 聂少平 ,谢明勇 ,罗珍 .茶叶多糖的抗氧化活性研究 [J].天然产物研究与开发 ,2020,17(5):549552. 第 35 页 [6] 全吉淑 ,尹学哲 ,金泽武道等 .茶多糖抗氧化作用的研究 [J].中药材 ,2020,30(9):11161118. [7] 梁进 .茶叶多糖的化学修饰及体外抗凝血作用研究 [D].安徽农业大学 ,2020. [8] 范斌 .茶多糖降血糖作用的研究 .糖尿病新世界 [J],2020 年第 03 期 . [9] 汪东风 ,王林戈 ,张莉等 .绿茶对糖尿病的防治作用 [J].茶叶科学 ,2020,30(4):243250. [10] 苏永昌 .乌龙茶多糖的提取工艺、生物活性及高多糖优异种质资源的研究 [D].福建农林大学 ,2020. [11] 周小玲 .茶多糖的定量、定性及生物活性研究 [D].中国海洋大学 ,2020. [12] 曹鹏飞 .茶多糖提取工艺条件的正交试验研究 [J].安徽农业科学 ,2020,35(14):42874287,4322. [13] , ., , , et al.. A colorimetrlc method for the determination of sugars. Nature, 1951, 168: 167. [14] , , , , et al. Colorimctric method for dctcrmination of sugars and related substances. Analytical Chemistry, 1956, 28: 350356. [15] HE Congfen ,LI Peng,ZHAO Hua,SONG Liya,ZHU Jun,DONG Yin—mao. Extraction Optimization of Polysaccharides from Pitaya Science amp。 Technology,2020,12(7)。 0001700019,00049. [16] 罗毅 ,潘细贵 ,刘刚 ,李运飞 等 .苯酚 硫酸法测定多糖含量显色方式的优选 [J].中国中医药信息杂志。 2020 年 01 期 . [17] 任少红 ,佟建利 ,李志富等 .苦丁茶多糖的含量测定 [J].泰山医学院学报 ,2020,27(5):421422. [18] 于淑池 ,林静 等 .龙井茶多糖的提取工艺研究 [J].安徽农业科学 ,2020,39(8):47764778. [19] 武晓英 ,侯冬岩 ,回瑞华等 .黑茶中茶多糖含量的测定 [J].鞍山师范学院学报 ,2020,13(2):3638. [20] 王秀萍 , 朱海燕 , 陈常颂 等 . 福建茶树良种的粗茶多糖提取试验研究 [J].江西农业学报 ,2020,21(7):139142. [21] 孙伙香 ,吴坷 等 .茶叶多糖的提取方法探讨 [J].湖北第二师范学院学院报 ,2020,26(2):3638. [22] 李碧婵 ,马森 等 .武夷岩茶中茶多糖的提取研究 [J].南平师专学报 ,2020,26(2):4042. [23] 黄杰 ,孙桂菊 ,李恒等 .茶多糖提取工艺研究 [J].食品研究与开发 ,2020,27(6):7779. 第 36 页 致 谢 衷心感谢药学院的各位领导和各位老师四年来对我的精心栽培。 特别 感谢胡老师对本论文的指导。 感谢各位同学在实习期间给予的帮助。 第 37 页 外 文 文 献 翻 译 译文题目 ： 苯 酚 硫酸法测定传 统 中 药温郁金多糖的含量 第 38 页 第 39 页 第 40 页 第 41 页 第 42 页 第 43 页 第 44 页 苯酚 硫酸法测定传统中药 温郁金多糖的含量 摘要 温郁金在中国被广泛用作中药材。 本文将使用苯酚 硫酸法测定温郁金多糖的含量。 其中涉及三个因素， 5%苯酚用量，硫酸用量，和水浴温度，我们采取 L9(3)3 的正交试验设计，得到了最佳的比色方案为：将 的多糖溶液， 5%苯酚溶液 和硫酸溶液 混合，于玻璃容器中以恒定的速率搅拌，然后保持水浴温度 40176。 C。 冷却到室温 20min 后，用 UV2501 PC 吸收光谱，测定在 485nm 波长处多糖的吸光度值，分别得到温郁金中多糖的含量为 %， %， %， %，%和 %。 结果表明这个方法是准确，有效，和实用的，也可以用于其它细菌多糖的含量测定。 关键词 含量测定； 苯酚 硫酸法； 正交实验设计； 多糖； 温郁金 1 前言 在中国温郁金是一个传统的药用植物，它的根在中国药典中明确指定为草药，即温 郁金根，具有广泛的药用价值 [12]。 温郁金的首次使用记录是在公元 627 649年的 Yao Xing Lun 中，具有排除血液淤积和减轻疼痛的功效 [3]。 现在它被用作治疗肝炎、月经不调和癫痫等，在很多中国家庭里，它的草药被用作温补食物。 近些年来，植物多糖已经被看作生物分子修饰中重要的一类。 文献显示 [45]酚类色素、香精油和多糖等都是温郁金中的主要成分。 温郁金中的多糖具有抗肿瘤、抗氧化活性。 本文采用超声波法提取温郁金多糖。 多糖的含量测定采用苯酚 —硫酸法，用葡萄糖溶液制作标准曲线 [6]。 在一些测定 多糖含量的比色法中，苯酚 硫酸法 [78]是最容易和也最准确的方法。 苯酚 —硫酸法的广泛运用在于他的灵敏性和简易性。 其它方法如：蒽酮 硫酸法 [9]，地衣酚法 [10]、或间苯二酚法 [11]灵敏性方面均可行，但是这几种方法操作不太方便。 因为潜在的几种参数影响比色，故最优化的测定条件是比色最关键的一步。 其中涉及的三个因素， 5%苯酚用量，硫酸用量和水浴温度，采用了 L9(3)3 的正交试验设计方案，得到了最佳的比色方案为：将 ， 5%苯酚溶液 和硫酸溶液 ，于玻璃容器中以恒定的速率搅 拌，然后保持水浴温度 40176。 C。 冷却到室温 20min 后，用 UV 2501 PC 吸收光谱，于 485nm 波长处测定多糖的吸光度值。 2 实验 器材和试剂 KQ205B 超声波清洗机（昆山超声波器械有限公司，中国） 第 45 页 UV2501 PC 吸收光谱仪（ 日本岛津公司，日本 ） 所有化学试剂都为分析纯，来自天津化学试剂公司（天津，中国） 所用样品和溶液都使用滤过和去离子的水 材料 温郁金的根来自中国不同地区（表 1），通过浙江林业大学天然产物研究中心的凭证标本的比对，为 LOU Luhuan 教授所确证。 样品已经风干，在高速旋转粉碎机中粉碎，粉末部分筛选通过 60筛孔。 之后粉末样品储存在称量瓶直到分析。 温郁金多糖的制备 精密称取样品粉末 ，加入 80%的乙醇于索氏提取器中预处理，除去有色物质，非活性酶，非天然的自由蛋白 [12]。 将残渣置入烧瓶中，加入。 然后将其放入 KQ205B 超声波清洗机中于 60176。 C 提取 30min。 于提取液中加入 95%的乙醇，放入 4176。 C 的冰箱中冷藏过夜，沉淀得到多糖。 沉淀物通过离心分离与乙醚和丙酮组成的混合液提取分离得到。 此操作重复两次，就得到了温郁金中的多糖。 多糖的测定采用苯酚 —硫酸法，用葡萄糖制作标准曲线 [6]。 比色法的正交试验设计 因为不同潜在的参数影响比色，最优化的实验条件是比色的关键步骤。 事实上，苯酚用量，硫酸用量和水浴温度被认为是重要的影响因素。 比色方案可以通过逐步的实施或者采用实验设计以达到最优化。 在现今的研究中，所有的选择因素都通过 L9(3)3 正交试验设计方案得到检验。 不同的参数和用量如下表层现：（表 2） 第 46 页 统计学分析 所获得的数据用 ANOVA方法进行统计学分析（ SPSS 版本 ） 3 结果与讨论 最大吸收波长的测定 最大吸收波长的测定采用略作修改的（ Habibi， Mahrouz， Vignon， 2020） [13]方法。 将 的标准葡萄糖稀释溶液， 5%苯酚溶液 和硫酸溶液 于玻璃容器中混合，然后以恒定速率进行搅拌，保持水浴温度 40176。 C. 在冷却至室温 20min 以后，于 300 600nm 波长范围内进行吸光度值测定。 同时用 的蒸馏水进行。