中草药抗耐药性大肠杆菌的抑菌初步实验研究(编辑修改稿)

中草药抗耐药性大肠杆菌的抑菌初步实验研究(编辑修改稿)内容摘要：

激素相似的作用，并能减轻或防止、消除外激素的毒副作用，而被认为是类激素样作用物；抗应激作用，目前在防治家畜应激综合征的研究中，发现一些中草药有提高机体防御抵抗力和调节缓和应激的作用；毒副作用小，不易产生耐药性，具有改善畜禽产品品质的作用，中草药所含绝大多数成分对畜禽有 益无害，即是是用来防止疾病的一些有毒中草药，亦可以经自然炮制或精制提取和科学配方而使毒性减弱或消除。 [56] 正 文 实验仪器与材料 ：黄连、黄芩、夏枯草、秦皮、苦参、甘草、石榴皮、连翘、党参、大黄（均购于市场） 、大肠杆菌菌液（由江西中医药大学实 验室提供） 水煎剂的制备 ： [7] 将草药烘干后各称取 100g 加水 1— 2L，浸泡 30min 后煎煮，煮沸后文化煎 30min，用纱布过滤药液，药渣加水 — 煮沸后煎 30min，过滤药液，合并两次药液，浓缩、离心后定容至生药浓度为 ，并消毒灭 菌备用。 中药提取物药敏纸片的制备 ： 将普通定性滤纸用打孔机打成若干圆形纸片，直径 6mm，置于干燥洁净的试管内，放入高压蒸汽灭菌器中，经 121℃ 1520min 高压灭菌后，取出，放入干燥箱内进行干燥，然后取经干燥后的纸片一定数量，分别放入各种中药提取液中，浸泡 40min，取出放置在超净台内 24 h，晾干置 4 ℃冰箱内保存备用。 培养基： MH 琼脂、麦康凯琼脂、营养肉汤 （ 均购于北京奥博星生物技术责任 有限公司） 营养肉汤 ：称取 18g 加入 1000mL 蒸馏水，加热煮沸溶解， 121℃高压灭菌 15min 备用。 麦康凯琼脂 ：称取 52g 加入 1000ML 蒸馏水中， 116℃高压灭菌 20min。 营养琼脂 ：称取 45g，加入 1L 蒸馏水中， 121℃高压灭菌备用。 江西中医药大学毕业论文 5 糖发酵培养基的制备方法 试剂 蛋白胨 NaCl %溴甲酚紫乙醇溶液 蒸馏水 用量 10g 5g 1~2mL 1000mL pH 另配 20%糖溶液（葡萄糖，乳糖）各 10mL。 制法 : ⑴ 将上述含指示剂的蛋白胨水培养基（ ）分装于试管中 ,在每管中放一倒置的小玻璃管。 ⑵将已分装好的蛋白胨水和 20%的各种糖溶液分别灭菌，蛋白 胨水 121℃灭菌 20min；糖溶液 112℃灭菌 30 分钟。 ⑶灭菌后，每管以无菌操作分别加入 20%的无菌糖溶液 (按每 10mL 培养基中加入 20%的糖液 ，则成 1%的浓度 )。 配制后的试管必须洗干净，避免结果混乱。 蛋白胨水培养基的制备方法 121℃ 灭菌 20min。 试剂 蛋白胨 NaCl 蒸馏水 用量 10g 5g 1000mL pH 葡萄糖蛋白胨水培养基的制备方法 试剂 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 蒸馏水 用量 5g 5g 2g 1000mL 将上述各成 分溶于 1000mL 水中，调 ~，过滤。 分装试管，每管 10mL， 112℃灭菌 30 分钟。 细菌纯化培养： 无菌条件下将保存的大肠杆菌涂布麦康凯琼脂平板， 37℃培养 12h16h 后挑菌于营养肉汤， 37℃再培养 12h16h，保存备用。 在无菌操作台内，将接种环用酒精灯灼烧灭菌并冷却后，在 LB 培养平板（大肠杆菌）中挑选单个菌落，伸入液体培养基试管中，在接近液面的管壁上轻轻研磨，并沾取江西中医药大学毕业论文 6 少量肉汤调和，使菌混合于肉汤中，并塞好瓶塞。 将接种后的 LB 培养基试管（ 5mL 培养基）放入恒温摇床（ 37℃， 250 次 /分）过夜。 大肠 细菌的 生化鉴定试验： [8] a、糖发酵试验 取可疑菌分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管，37℃培养 2～ 3d，观察各管产酸产气情况。 b、甲基红（ MR）试验 取可疑菌接种葡萄糖蛋白胨水， 37℃培养 2～ 3d，加入 甲基红试剂两滴，立即观察结果，红色者为阳性，黄色者为阴性。 c．吲哚试验 取可疑菌接种至蛋白胨水培养基中， 37℃培养 2～ 3d。 先加入 34滴乙醚，塞紧棉塞振摇试管，使乙醚与培养液充分混匀，静置试管架上片刻，待乙醚浮于液面上层时，沿管壁加入吲哚试剂 2～ 3 滴，在接触面呈红色者即为阳性反应。 d．。