word微生物常规鉴定技术(编辑修改稿)

word微生物常规鉴定技术(编辑修改稿)内容摘要：

苯，摇动试管以提取和浓缩靛基质，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入 Kovacs 氏试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。 实验证明靛基质试剂可与 17 种不的靛基质化合物作用而产生阳性反应，若先用二甲苯或乙醚等进行提取，再加试剂，则只有靛基质或 5甲基靛基质在溶剂中呈现红色，因而结果更为可靠。 1三糖铁（ TSI）琼脂试验 试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置 36177。 1℃培养 18~24h，观察结果。 本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（ 变黄）；产生硫化氢（变黑）。 葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。 1氨基酸脱羧酶的测定 有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类和二氧化碳。 此反应在偏酸的条件下进行。 当培养基含胺类时呈碱性反应，使指示剂变色。 接种与观察结果：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。 接种后封油，对照管与测定管同时接种封油。 肠肝菌科的细菌于 37℃培养 4 天观察。 当指 示剂呈紫色或带红色调的紫色者为阳性，呈黄色者为阴性。 对照管应呈黄色反应。 1硫化氢（ H2S）试验 有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。 试验方法：在含有硫代硫酸钠等指示剂的培养基中，沿管壁穿刺接种，于36177。 1℃培养 24~28h，培养基呈黑色为阳性。 阴性应继续培养至 6 天。 也可用醋酸铅纸条法：将待试菌接种于一般营养肉汤，再将醋酸铅纸条悬挂于培养基上空，以不会被溅湿为适度；用管塞压住置 36177。 1℃培养 1~6 天。 纸条变黑为阳性。 1柠檬 酸盐或丙酸盐的利用 某些细菌能利用柠檬酸盐或丙酸盐作为碳源，及磷酸胺作为氮源，将柠檬酸分解为二氧化碳，则培养基中由于有游离钠离子存在而呈碱性。 接种与观察结果：取幼龄菌种接种于斜面上，适温培养 3－ 7 天，培养基呈碱性（蓝色）者为阳性反应，不变者则为阴性。 1利用丙二酸盐试验 丙二酸盐是三羧酸循环中琥珀酸脱氢酶的抑制剂。 能否利用丙二酸盐，也是细菌鉴定中的一个鉴别性特征。 许多微生物代谢有三羧酸循环，而琥珀酸脱氢是三羧酸循环的一个环节，丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶，与丙二酸不被分解，所以琥珀酸脱氢酶被占据，不能释放出来催化琥珀酸脱氢反应，抑制了三羧酸循环。 接种和观察结果： 用幼龄菌种接种测定培养基和空白培养基，于适温培养 1－ 2d，观察培养基变色情况。 如测定培养基生长并变蓝色，表示可利用丙二酸盐，为阳性结果。 反之，如测定培养基未变色，而空白对照培养基生长，则为阴性，即不利用丙二酸盐。 1葡萄糖酸盐的氧化 假单胞菌属和肠道杆菌科的细菌，可氧化葡萄糖酸为 2－酮基葡萄糖酸。 葡萄糖酸无还原性基团，氧化后形成酮基，则可将斐林氏试剂的呈蓝色的铜盐还原为砖红色的 Cu2O 沉淀。 试验方法：用 的磷酸缓冲液配制成 含 1％葡萄糖酸盐（可用葡萄糖酸钠或葡萄糖酸钙）的溶液。 分装试管，每管 2mL。 刮取适温培养 18－ 24 小时的菌苔至 2mL 的葡萄糖酸盐溶液中制成浓的菌悬液，置 30℃过夜，然后每管加入 的斐林试剂，放在沸水浴中加热 10 分钟，试管中液体由蓝色变为黄绿，绿橙色或出现红色沉淀者为阳性反应，如溶液不变色者为阴性。 1硫化氢 靛基质 动力（ SIM）琼脂试验 试验方法：以接种针挑取菌落或纯养物穿刺接种约 1/2 深度，置 36177。 1℃培养 18~24h，观察结果。 培养物呈现黑色为硫化氢阳性，混浊或沿穿刺线向外生长为有动力 ，然后加 Kovacs 氏试剂数滴于培养表面，静置 10min，若试剂呈红色为靛基质阳性。 培养基未接种的下部，可作为对照。 本试验用于肠杆菌科细菌初步生化筛选，与三糖铁琼脂等联合使用可显著提高筛选功效。 1β 半乳糖苷酶（ ONPG）的测定 本试验应用于肠肝菌科的鉴定。 测定步骤： （ 1） 将测定菌接种于 TSI 斜面上，培养于 37℃ 18h（或其他最适温度） （ 2） 挑取 1 大环菌苔入约 的生理盐水中制成菌悬液，每管加 1 滴甲苯，摇匀（有助于酶的释放），于 37℃放置 5 分钟。 （ 3） 在菌悬液中加入 的 ，测定管置于 37℃水浴培养。 经 30 分、 …… 24h 进行观察，如有黄色者则为阳性。 1耐盐性试验 本试验是观察渗透压对细菌生长的影响。 由于不同菌类耐盐性不同，故常以此作为鉴别特征。 一般可根据不同种类的菌株，选择其适合生长的培养基，在其中加入不同量的 NaCl，接种后观察其生长与否，以判断其耐盐性。 以肉汤培养液根据鉴定需要，配成不同浓度的 NaCl，如 2％、 ％、 5％、7％、 10％等。 培养基要求十分澄清，接种时应采用幼龄菌液，直针接种，适温培养 3－ 7d，与未接种的对照管对比，目测生长情况。 卵磷脂酶的测定 菌体如存在有卵磷脂酶，就能使卵磷脂分解生成脂肪和水溶性的磷酸胆碱。 接种与观察结果：将测试菌的菌液，环接在有卵黄的试管和不加卵黄的对照管中，适温培养 3 或 5 天观察。 假若与对照管相比较，在卵黄胰胨液中或表面，形成白色沉淀者，则为阳性反应，表示卵磷脂被分解，生成脂肪和水溶性的磷酸胆碱，说明有卵磷酶的存在。 另一种方法： 以无菌操作取出卵黄，放入灭菌的三角瓶中，加相当于等量的生理盐水摇匀后，取 10mL 卵黄液加入到溶化的约 50－ 55℃的 200mL 肉汁胨琼脂培养基中，混合均匀后倒入培养皿，制 成卵黄平板，过夜后即可使用。 接种与观察结果：将测试菌点接在卵黄平板上，每皿可分散点接 4－ 5 株菌、（芽孢杆菌以点接 1－ 2 株菌为宜）以不影响结果观察为度，如测试厌氧菌，则须在上面加盖无菌的盖玻片。 每株菌至少重复点接两皿。 适温培养 1－ 2d 观察，在菌落周围形成乳白色混浊环，表示卵磷脂被分解，生成脂肪，说明该菌株有卵磷脂酶存在。 2石蕊牛奶的反应 牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。 石蕊在中性时呈淡紫色，酸性时呈粉红色，碱性呈蓝色，还原时则自上而下地褪色变白。 细菌对牛 奶的作用有一下几种： （ 1） 产酸――细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红。 （ 2） 产碱――细菌分解酪蛋白产生碱性物质，使石蕊变蓝。 （ 3） 胨化――细菌产生蛋白酶，使酪蛋白分解，故牛奶变得比较澄清。 （ 4） 酸凝固――细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变化，当酸度很高时，可使牛奶凝固。 （ 5） 凝乳酶凝固――有些细菌能产生凝乳酶，使牛奶中的酪蛋白凝固，此时石蕊常呈蓝色或不变色。 （ 6） 还原――细菌生长旺盛，使培养基氧化还原电位降低，因此石蕊还原褪色。