毕业论文罗非鱼制取呈味肽的研究(编辑修改稿)

毕业论文罗非鱼制取呈味肽的研究(编辑修改稿)内容摘要：

6202428短肽得率 / %水解率 短肽得率 图 2 温度对碱性蛋白酶酶解作用的影响 温度的优选 在不同温度下，碱性蛋白酶酶解过程中水解率和短肽得率的最大值如图 2所示。 图 2可以看出，温度对碱性蛋白 酶的酶解作用有很大的影响，两个指标均因温度不同而具有较大的差异， 碱性蛋白酶在 55℃ 时的水解率和短肽得率均为最高。 虽然水解率和短肽得率的最大值在酶解过程的不同时间出现，但两者毕竟具有一定关联性， 55℃ 的温度条件有利于酶解，从而同时有利于获得较高的水解率和短肽得率。 8121620242840 45 50 55 60温度 / ℃水解率 / %81216202428短肽得率 / %水解率 短肽得率 图 2 温度对碱性蛋白酶酶解作用的影响 酶用量与时间的优选 在 55℃ 、 、液固比 3:1的条件下，按投入原料的蛋白质含量计算加酶量，分别加入 600 U/g、 800 U/g、 1000 U/g、 1200 U/g 的碱性蛋白酶进行酶解，不同加酶量的 短肽得率如图 5所示。 随着碱性蛋白酶用量的增大，酶解作用增强， 4 酶解前期的短肽得率也呈增大趋势。 但是，由于部分短肽继续被水解，酶解后期的短肽得率与加酶量的关系并不是正相关。 加酶量为 600 U/g、 800 U/g、 1000 U/g 和 1200 U/g 的 短肽得率最大值分别是 %、 %、 % 和 %，其中加酶量 800 U/g 在酶解 5 h 的短肽得率最高。 131517192123250 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10时间 / h短肽得率 / %6 0 0 U / g 8 0 0 U / g1 0 0 0 U / g 1 2 0 0 U / g 图 5 不同加酶量对短肽得率的影响 本章小结 采用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶对罗非鱼下脚料进行酶解， 碱性蛋白酶的酶解能力最强。 试验结果表明，温度、 pH、液固比及加酶量对碱性蛋白酶的酶解作用均有影响，碱性蛋白酶酶解制备呈味肽的最佳条件是：温度 55℃ 、 、液固比 3:加酶量 800 U/g 和酶解时间 5h。 在酶解的最佳条件下，短肽得率达到 %。 本次试验探索了罗非鱼下脚料酶解制备呈味肽的工艺条件，可为罗非鱼下脚料综合利用提供有价值的参 考。 5 第三章 氨肽酶产生菌的筛选与鉴定 材料与方法 材料与试剂 腐乳。 L 一亮氨酸一对硝基苯（ AR） , ACROS。 蛋白陈 F403 (BR),，牛肉浸膏((BR)，干酪素 (BR)，可溶性淀粉 (AR)，三（羟甲基）胺基甲烷 (AR)，中国医药（集团 )上海化学试剂公司。 培养基配制 富集培养基 (g/L ) 可溶性淀粉 8,酵母膏 2,干酪素 I0, KH2PO4 1, MgSO4 , 平板分离培养基 (g/L ) 可溶性淀粉 5，蛋白胨 2，干酪素 10, KH2PO4 1, MgSO4 7H2O , NaCl 5，琼脂 20,。 保藏培养基 (g/L ) 可溶性淀粉 2,蛋白胨 5，牛肉膏 2,酪蛋白 1，琼脂 20 , 初筛培养基 (g/L ) 麦芽糖 5,蛋白胨 12，牛肉膏 2, KH2PO4 1, MgSO4 7H2O , NaCl 2, 干酪素平板培养基 干酪素 4g， KH2PO4 ， Na2HPO4 7H2O ， MgSO4 7H2O ，琼脂25g，蒸馏水 1000mL，调节 ， 121℃灭菌 20min （干酪素需先用少量的 ，后用于配置培养基。 ） 菌种筛选流程与方法 无菌条件下称取 5g 腐乳，加入盛有 25mL 无菌生理盐水的 250mL 三角瓶内，振荡均匀，悬浮液在 80℃下保持 10min，取 2mL 接入盛有 20mL 富集培养基的三角瓶内， 37℃培养 18h。 将经富集培养的菌液用无菌生理盐水适当稀释，取一定量涂布平板， 37℃培养 18h,将生长较好，透明圈较大的菌落挑至肉汤斜面上保藏，以供 6 初筛用。 初筛方法 将平板分离所得的菌接入装有 5ml 初筛培养基的大试管内， 37℃培养18h，初测酶活。 酶活高的用于进行复筛。 复筛和发酵方法 把初筛的菌株点到复筛培养基上进行复选，并于结束后测酶活，选取酶活最高的作为菌种。 发酵：发酵培养基：可溶性淀粉 20 g/L，葡萄糖 20 g/L，蛋白胨10 g/L，牛肉膏 20 g/L，酪蛋白 10 g/L， KH2PO4 1 g/L， Na2HPO47H 2O 2 g/L，MgSO47H 2O g/L。 培养基配制后，调节 pH ，分装至 1000 mL 三角瓶，每瓶装液 200 mL， 121 ℃ 灭菌 20 min，冷却后备用。 将斜面菌种接入发酵培养基，每瓶接 1 环斜面菌种，置于 37 ℃ 、 200 r/min 的条件下振荡培养 36 h；在冰水浴中，采用 200 w 超声波细胞破碎仪对发酵液进行超声处理 5 min，再经 8000 r/min 离心分离 20 min，取得清液。 菌种鉴定方法 形态及生理生化特性鉴定 根据《常见细菌系统鉴定手册》和《工业微生物实验技术手册》进行形态鉴定及生理生化特性鉴定，并以《伯捷氏细菌鉴定手 册 (第八版 )》作为分类参考。 分析方法 初筛酶活测定方法 100μ L 发酵液 +100μ L (L 一亮氨酸对硝基苯胺LleupNA) ，点样板，上盖玻璃板， 30℃保温 20min，根据黄色深浅粗略判断酶活。 酶活高代表该菌种适用于复筛。 实验结果与讨论 高产菌种筛选 采用逐步递进的方式每层都选择酶活最高的菌株，采用优选策略。 并最后做对照试验测定氨肽酶活最高的组别。 7 测酶活方法 摇床转速 200 转，温度 37℃， 摇床 48 小时，发酵液取出测 OD600， 然后调 PH至 ，放 4℃ 冰箱 20 分钟，然后冰浴超声破碎：（ 30秒 超声， 30 秒 间歇，共 5个循环，每次放冰箱 20 分钟）。 超声完毕，离心取上清液。 对照组： 6ml 的 TrisHcl 缓冲液 + 去离子水 测定组： 6ml 的 TrisHcl 缓冲液 + 酶液 测定方法 40℃水浴预热 5min，向 对照组 和 测定组 同时加 26mM LNA 乙醇溶液，准确反应 10min，立即于 405 nm 处比色。 测氨肽酶酶活记录 菌种 摇床前 PH 摇床后 PH 摇床前OD600 摇床后OD600 酶液 原 液OD405 酶液原液 的酶活U/mL 酶液稀释十倍OD405 枯草芽孢杆菌 7 6 3.9563 — 巨大芽孢杆菌 7 4.6996 — L71811 7。