学生细胞生物学课题项目申请书--丹参治疗心血管研究(编辑修改稿)

学生细胞生物学课题项目申请书--丹参治疗心血管研究(编辑修改稿)内容摘要：

用通路。 丹参有效成分的 分子 作用通路的功能验证 对发现的候选组合靶标进行分析，如果是已知功能基因或蛋白质则直接进行组合筛选；如果是新基因或蛋白质则首先进行结构和功能研究；然后采用反义核酸、 siRNA 技术， RTPCR 技术， Western 印迹技术等在细胞和动物模型上对丹参有效成分的分子作用通路进行组合功能验证。 丹参有效成分 最佳 “分子配伍 ”的筛选 进一步用丹参有效单体的不同成分、不同剂量、不同比例的配伍依次在细胞和动物模型上对候选组合靶标进行验证，在 “化学基因组学 ”研究技术平台层面上进行有效成分配伍研究，以期找到疗效确切、安全经济的单体及其组合。 （课题分解） ： 设计并制备人心血管相关芯片： 根据心血管疾病相关文献，设计并制成低密度的寡核苷酸芯片。 从 Cardio 数据库 (Cardiovascular Disease Related Database 8 )中找出大约 400 种心血管疾病相关基因，这些基因的人类 mRNA 序列来自 GenBank。 使用大规模探针设计软件Mprobe 来设计寡核苷酸探针，芯片质控方法采用阳性对照结合看家基因和阴性对照，对逆转录、杂交过程进行监测和结果分析。 建立损伤的细胞模型： 动脉粥样硬化 (atherosclerosis, AS)的形成涉及许多环节，包括脂质代谢紊乱，血管内皮细胞损伤，平滑肌细胞增殖， 从中层迁移到内膜下，单核和巨噬细胞的迁移、增生和分化，泡沫细胞的形成，细胞的坏死和脂质沉积等。 本项研究拟建立以 TNFα (2ng/ml)、 oxLDL ()损伤的血管内皮、平滑肌、心肌及血小板模型。 丹参主要单体对人血管内皮细胞、平滑肌细胞、心肌细胞等药理作用的筛选： 选择药理试验剂量范围；凋亡保护试验；白细胞粘附试验；凝血纤溶物质（ PAI1, tPA）分泌； NO 分泌；内皮素 1 分泌；平滑肌细胞增殖实验。 丹参有效成分保护心血管作用的表达谱及蛋白质组学研究： 丹参有 效成分孵育内皮细胞、平滑肌细胞等 612 小时，再以TNFα、 oxLDL 刺激 6 小时，提取细胞的 RNA 及总蛋白进行表达谱及蛋白质组学研究，发现差异表达基因及蛋白，作为丹参有效成分的潜在靶标。 9 丹参有效成分保护心血管作用的机理研究及靶标验证： 以反义核酸、 siRNA 技术， QRTPCR、 Western Blot 及通路抑制剂等技术研究丹参有效成分及其组合保护心血管作用的分子机制及功能验证。 丹参有效成分保护心血管作用的动物试验及临床观察： 观察丹参活性组分对实验性动脉粥样硬化家兔 的治疗作用。 雄性新西兰兔高血脂饲养 12－ 16 周形成实验性的动脉粥样硬化，给予高脂饮食同时给予丹参活性成分， 4， 8， 12， 16 周末采血检测血流变、血脂情况，于 16 周时处死，测定血脂变化 TC、 TG、 LDLC，血清和血管壁中 NO 和 ET－ 1 的含量变化。 测定颈动脉受损内皮细胞黏附因子 VCAM－ 1 的变化。 与阳性对照药复方丹参方及辛伐他汀比较。 观察丹参活性组分对实验性高血脂症家兔的治疗作用。 雄性新西兰兔高血脂饲养 2 周形成实验性的高血脂症，然后分组连续给予高脂饮食和丹参活性成分， 4 周后高脂给量减半，继续给予 丹参动脉粥样硬化活性成分至 6 周，测定给药后 4 和 6 周时的血脂变化 TC、 TG、LDLC，血清和血管壁中 NO 和 ET－ 1 的含量变化。 测定颈动脉受损内皮细胞黏附因子 VCAM 的变化。 与阳性对照药复方丹参方及辛伐他汀比较。 观察丹参活性组分对大鼠缺血再灌注 (Ischemic reperfusion injury， IRI)的影响，对血栓烷Ａ 2 和前列环素 (TXA2/PGI2)比值的调 10 节作用，以及一氧化氢 (NO)、内皮素 (ET－ 1)、纤维蛋白原 (Fig)水平，改善血液流变性等作用，改善ＩＲ的病理生理。 与阳性药物复 方丹参方比较。 观察丹参活性组分对高黏滞血症家兔和急性高黏滞血症模型大鼠血管内皮分泌功能的影响，采用复合因素（高分子右旋糖酐、肾上腺素、牛血清白蛋白）、长时间 (11d)造成高黏滞血症慢性模型；采用１次性静脉注射高分子右旋糖酐，皮下注射肾上腺素造成急性高黏滞血症模型。 分别用丹参活性组分进行治疗，观察血管内皮细胞分泌功能的变化及丹参活性组分的干预效果。 检测指标：红细胞变形能力 , 红细胞比容、红细胞聚集指数 , 红细胞电泳时间；血液流变性；全血比黏度、血浆纤维蛋白原；血小板聚集和黏附性及 TXB 6－ Keto－。