烤烟黄叶突变体及dh系的农艺性状与品质分析毕业论文(编辑修改稿)

烤烟黄叶突变体及dh系的农艺性状与品质分析毕业论文(编辑修改稿)内容摘要：

示叶绿素 a和 b的浓度； Cx 表示类胡罗卜素的总浓度； D665 、D64 D470 表示叶绿体色素提取液在波长 665nm、 649nm 和 470nm 下的 OD 值。 步骤： 分别选取以上材料各 5株，每株采摘中部叶片各一片，去掉两端和叶脉，剪成 2mm 左右的细丝混 匀，用电子天平精确称量 放入 25mL 具塞刻度试管中（每个材料三次重复），加入 15mL95%的乙醇，置于 4℃的冰箱中浸提，期间贵州大学本科毕业论文（设计） 第 8 页 摇晃 3至 4次，直至叶片全部变白，表明叶绿素已被浸提干净，然后将浸提液定容到 25ml。 以 95%乙醇为空白对照，用分光光度计分别测定波长在 665nm、 649nm和 470nm 下的 OD值。 按公式分别计算叶绿素 a、 b和类胡萝卜素的浓度（ ）及叶绿素总浓度。 求得色素的总浓度后再按以下公式计算组织中各色素的含量（邹琪， 20xx）。 样品鲜重（或干重） 稀释倍数）提取液体积（）色素浓度（叶绿素色素含量  mlC 化学成分的测定 试验材料 试验材料与农艺性状测定相同， 供试材料为 K32黄叶突变体、 K326 黄叶突变体的花药培养所获得的 DH 系（ H H8）、黄叶 k326 ( K326 黄叶突变体 K326 BC4 F3)， 以 K326 作对照。 、 试验方法 于烟株团棵期、旺长期、现蕾期、成熟期，选取中部 3 片叶，每个材料 10株。 去除表面污渍、抽去主脉后，将叶片剪成碎块放入烘干箱内， 105℃杀青、60℃烘干、粉碎过 40目筛 ,装入自封袋中以备化学成分分 析， 同样选取烤后的中部 3 片烟叶，去除表面污渍、抽去主脉后，将叶片剪成碎块放入烘干箱内， 60℃烘干、粉碎过 40目筛 ,装入自封袋中以备成分分析。 分析项目分别为全氮含量、全磷含量、全钾含量、总糖含量、烟碱含量及蛋白质含量。 （ 1）全氮采用过氧化氢 硫酸消化法 （一）消化 准确称取磨细混匀的烟样 装入 100ml 准备好的凯氏烧瓶底部，标号。 样品要加到烧瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶茎上。 加少量水使之湿润，再依次加浓硫酸 ，混合湿润后慢慢地加热至开始冒出大量白烟，微沸约 5分钟继续加热微沸 25分钟，取下稍放冷， 逐滴加入 30%过氧化氢。 作 1个空白对照，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，对样品测定进行校正。 贵州大学本科毕业论文（设计） 第 9 页 （二）蒸馏和吸收 蒸馏和吸收是在微量凯氏定氮仪内进行的。 凯氏定氮蒸馏装置种类甚多，大体上都由蒸气发生、氨的蒸馏和氨的吸收三部分组成。 （三）滴定 样品和空白蒸馏完毕后，一起进行滴定。 含氮量运用下列公式计算： 含水率）（ 取用倍数烟叶中的全氮 1W  NV 注：式中 NV 标准酸溶液的浓度 (mol/L)； W 试样重量 (克 )； 每毫摩尔氮的克数。 （ 2） 全磷含 量的测定：矾铝黄比色法。 吸取上述测 N 的消化待测原液 10ml 于 50ml 容量瓶中，加两滴二硝基酚指示剂，用 NaOH 中和至刚呈黄色，加入 10ml 钒钼酸铵试剂，用水定容摇匀。 15 分钟后在分光光度计波长 440nm 处和 2cm 光径的比色槽进行比色测定，以空白溶液调节吸收值的零点。 结果计算如下： 106*1* 100***ppmP% 含水率）（样品重 分取倍数比色体积 （ 3） 全钾含量的测定：火焰光度法。 吸取上述 N、 P的消化待测液 5ml 于 100ml 容量瓶中，用水定容 摇匀，直接在火焰光度计上测定，记录检流计的读数，然后从标准曲线上查得待测液的钾的浓度。 结果计算如下： 1061 100ppmK%   含水率）（样品重 分取倍数测读液体积 注：式中 ppm— 从工作曲线查得溶液中 K 的 ppm数；分取倍数 — 待测液体积 /测读液体积； 106— 将 ug换算成 g 的除数。 （ 4） 烟碱含量的测定：紫外分光光度法。 在强碱性介质（ Ph） NaOH 存在下进行蒸汽蒸馏，使全部植物碱包括烟碱、去甲基烟碱、假木贼碱和新烟碱等挥发而逸出，然后根据烟碱对 259nm 紫外光具有最大吸收 ，并且吸光度与烟碱含量正相关的性质，用紫外分光光度计测得待测液烟碱的吸光值，并进一步计算出烟碱的含量。 贵州大学本科毕业论文（设计） 第 10 页 称取测试样品 左右，将样品移置于 500ml 凯氏瓶中，加 NaCl25g，NaOH3g，再加蒸馏水 25ml 左右，使样品全部在瓶底，然后将凯氏瓶连接于蒸汽蒸馏装置，用蒸汽蒸馏，用装有 10ml2NH2SO4溶液的 250ml 三角瓶，收集 220230ml馏出液，并检查烟碱是否蒸净（方法：用小试管接少量蒸出液加入 12%硅钨酸和2NH2SO4 溶液各一滴，若混浊是没有蒸彻底，清澈时即可停止蒸馏）蒸净后移到250ml 容量瓶稀释定容至刻度，用移液管吸取 10ml 到第二个容量瓶（ 100ml）中并用 ，将 10ml2NH2SO4溶液用蒸馏水稀释至 250ml 做空白，并按照测试样品溶液程序进一步将空白稀释至 100ml，用紫外分光光度计在 236nm、 259nm、 282nm 处测吸光值，若吸光值在 259nm 处超过 ，则将所蒸馏得到的试样溶液需扩大稀释倍数。 结果计算如下： )1( )]282236(2/1259[   含水率样品重烟碱 VAAAF 注： ：与硅钨 酸重量法相比的校正系数其中 A 为校正后的吸光值， A23 A25 A282 分别是在 2325 282nm 处观察到的吸光值； ； F— 稀释倍数； V蒸馏液的总体积 （ 5） 总糖的测定：砷钼酸比色法（ Somogyi 法） 原理：在碱性条件下，还原糖可使铜离子（ Cu2+）还原成亚铜离子（ Cu+），氧化亚铜可与砷钼酸试剂生成蓝色溶液，生成的砷钼蓝溶液于 560nm 下光密度与还原糖浓度呈正比。 此方法灵敏度高，测定范围为 25～ 200微克，而且产物很稳定。 所以，不仅可以提高测定速度。 还便于测定多份样 品。 因此， Somogyi 铜试剂比色法是目前糖定量测定中较好的方法之一。 （一）制作标准曲线 准确称取 克葡萄糖溶于 1 升水中，取 100 毫升再定容至 1 升，即 150微克 /毫升。 取 6支长试管，分别加入 0、 、 、 、 及 毫升 150微克 /毫升的葡萄糖溶液，再加水补充到 毫升。 然后准确加入 毫升铜试剂，盖上玻璃塞。 放入沸水浴中（试管必须浸入 1/2），自再沸腾起准确记时，煮沸 20 分钟， 然后立即取出，放在冷水中冷却 5 分钟。 最后，加入 钼酸试剂，再加 毫升蒸馏水稀释，摇匀 后于 560nm 处比色。 以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线。 最好同时平行做三份。 贵州大学本科毕业论文（设计） 第 11 页 （二）糖液的制备 称取 克粉碎的样品，放入锥形瓶中，加入 20毫升 80%酒精，在 70℃水浴中浸提 30分钟，加入 2ml 醋酸铅（沉淀蛋白质），过滤前加 2ml 草酸钾，将上清液滤入 100 毫升容量瓶。 残渣再分别用 10毫升酒精浸提两次各 20分钟，过滤，用热酒精冲洗滤渣，定容至刻度。 吸取 5 毫升放入 50 毫升容量瓶，加水稀释到刻度。 （烟草样品）此即为可溶性糖液。 此糖液可用于烟叶还原糖、水溶性总糖的测定，而残渣可用于淀粉的测定。 （三）水溶性总糖的测定 吸取清洁后的可溶性糖液 10ml 放入 25m1 容量瓶中，加入比重 HCl 2m1，煮沸 5 分钟，使之转化成还原糖后用 5mol/L NaOH 溶液中和，用酚酞为指示剂加至淡红色为止。 中和后用水稀释至刻度。 准确称取稀释液 ，按标准还原糖测定步骤进行，测得吸光值，从 标准曲线 上查出还原糖含量。 二、结果与分析 DH 系的农艺性状分析 黄叶突变体及其 DH 系与正常绿色材料的叶色存在显著差异，其农艺性状也与绿色材料存在一定差异。 本试验中选取烤烟黄叶突变体、黄叶 K32 K326 黄叶突变体的花药培养所获得的 2个 DH 系（ H H8）和本地主栽品种 K326（ CK）作为供试材料。 同时播种，相同的育苗条件和 田间管理。 观察发现突变体出苗的时间较对照略早，株高、叶长、叶宽大于对照，长势强于主栽品种 K326。 如图 1所示，在还苗期黄叶突变体和 H8株高均高于 K326，黄叶 K326 和 H1株高略低于 K326，但各材料与 K326 株高差异不显著；在团棵期黄叶突变体株高略高于 K326，黄叶 K32 H1 和 H8株高略低于 K326，但差异不显著；在旺长期黄叶突变体、黄叶 K32 H8 株高均 高于 K326 且差异显著， H1株高低于 K326；在成熟期株高最高为 H1，其次是 H黄叶 K32黄叶突变体，各材料株高均高于 K326 且差异显著。 在假植期、团棵期和旺长期，除 H1外各材料叶片数差异不大，在成熟期叶片数最多为 H8，其次是 H K32黄叶 K32黄叶突变体，并且各材料间差 贵州大学本科毕业论文（设计） 第 12 页 图 1 不同生育期株高差异 异显著（图 2）。 假植期时 黄叶突变体与黄叶 K326 相同，均为 片，较 K326多 片， H1 为 片，较 K326 少 片， H8为 片，较 K326 多 片。 团棵期时黄叶 K326 和 H8与 K326 相当，分别为 1 和 片，突变体为10 片， H1 为 片，旺长期黄叶突变体和黄叶 K326 均为 片， H1 为 片， H8 为 16 片，对照为 片， 其中 H1 在团棵期和旺长期叶片数比 K326 少34 片。 成熟期 H8 叶片数为 片， H1叶片数为 片， K326 叶片数为 片，黄叶 K326 叶片数为 片，最少为黄叶突变体 片， 可能是因为黄叶突变体的侧芽较多、且侧芽生长较旺盛，打顶去掉的叶片较多，导致了黄叶突变体的叶片数较少。 中部叶长如图 3所示，假植期五者中部叶 长差异不大，团棵期黄叶突变体中部叶长最大，为 ，其次是 H黄叶 K32 K326，中部叶长分别为 、 最短为 H1，中部叶长为。 旺长期黄叶突变体、黄叶K32 H8 中部叶长均大于 K326， H1中部叶长低于 K326，中部叶长由长到短为黄叶 K32黄叶突变体、 H K32 H1，中部叶长分别为 、 、 、。 成熟期黄叶突变体、黄叶 K32 H H8 中部叶长均大于 K326，最长为 黄叶 K326，中部叶长为 ，其次是 H黄叶突变体、 H1，中部叶长贵州大学本科毕业论文（设计） 第 13 页 分别为 、 、 ，对照 K326 中部叶长最短，为。 腰叶宽如图 4 所示，各时期均为黄叶突变体最宽，成熟期时黄叶突变体与K326 的差距达到最大值。 黄叶突变体的其中一个亲本 G28 的叶片较宽， 图 2 不同生育期叶数差异 图 3不同生育期中部叶长差异 叶型为心型，这可能与黄叶突变体的叶片较宽有一定关系。 在假植期 K326 比黄叶 K326 宽 ，其余时期黄叶 K326 均比 K326宽，成熟期是二者差距达到最贵州大学本科毕业论文（设计） 第 14 页 大值。 在假植期、团棵期、旺长期 H1 中部叶均比 K326 窄，分别窄 、 ，成熟期 H1 比 K326 宽。 在假植期 H8 与 K326 腰叶宽差异不大，团棵期、旺长期、成熟期 H8 均较 K326 宽，在成熟期时 H8与 K326 的差距达到最大值。 图 4不同生育期中部叶宽差异 图 5 各时期叶厚动态变化 贵州大学本科毕业论文（设计） 第 15 页 叶厚如图 5所示，整个生育期均为 K326 的叶片最厚，黄叶突变体最薄，黄叶 K32 H1和 H8 介于二者之间。 叶厚整体呈现先下降后增加的趋势 ，旺长期达到最小值，可能是由于从假植期到旺长期，根、茎生长旺盛分配到的有机物较多，导致叶片逐渐变薄。 旺长期之后植株发育基本完全，叶片的增长，增宽效率减小，但有机物还处于不断积累的状态，所以叶片再逐渐增厚。 综合以上农艺性状分析，本黄叶突变体、黄叶 K32 H8 田间长势强于对照，H1在成熟期时长势也强于对照，可知黄叶突变性状有促进叶片长、宽增加的作用。 烟草是以收获烟叶为目的的作物，叶片的增长和增宽有利于提高烟叶的产量和质量，有利于促进农民增产、增收，说明该黄叶突变材料具备较高的生产利用价值。 不 同时期光合色素含量变化与分析 在生长发育不同时期，对叶绿素 a（ Chla）、叶绿素 b（ Chlb），总叶绿素（ Chla+Chlb）类胡萝卜素（ Cx）含量的分析表明 (表 1)， K326 叶片中叶绿素 a、叶绿素 b、总叶绿素和类胡萝卜素含量均极显著或显著大于同一生育时期黄叶突变体、黄叶 K32 H1 和 H8。 在团棵期黄叶突变体与 K326 色素含量差异最大，黄叶突变体的 Chla、 Chlb 和 Cx 分别较对照低 %、 %和 %，但不同色素含量降幅差异不大，表明此黄叶突变材料为总叶绿素缺乏型。 叶片成熟时对照的 Chla 显著大于黄叶突变体、黄叶 K。