重要病毒跨种间感染与传播致病的分子机制研究

重要病毒跨种间感染与传播致病的分子机制研究内容摘要：

究不同流感病毒HA 蛋白与受体的作用特征 ； 在细胞模型上研究自噬影响流感病毒侵入的分子机制。 4. 流感病毒在不同宿主中的复制及跨种属传播机制；冠状病毒在不同宿主中的复制及跨种属传播机制；登革病毒在不同宿主中的复制及跨种属传播机制；病毒在不同组织中复制的 miRNA表达谱对病毒复制的调控及分子机制； 5. 运用蛋白 蛋白互作以及病毒学方法探索宿主限制性因子在流感病毒复制过程中的调控机制。 追踪宿主限制性因子与病毒核蛋白相互作用后对病毒复制、装配及成熟释放的影响和生物学意义。 通过色谱质谱技术对外周免疫相关细胞和中枢神经组织进 行蛋白质组学分析，发现狂犬病病毒感染前后宿主在蛋白质组水平表现出的差异点； 6. 建立病毒体内分布实时监测动物模型，对高致病性禽流感病毒等病毒的感染动力学进行初步探讨。 1. 获得 10 株以上病毒的部分基因组序列； 确定新型病毒与人类病毒在在血清学和基因序列上的差异。 2. 获得流感病毒、新型冠状病毒、乙脑病毒等的分离毒株和全基因组序列；获得流行毒株的遗传变异规律和生物学特性；建立病毒的反向遗传操作系统 1 套。 3. 获得乙脑病毒、登革病毒细胞候选受体；获得一些影响流感病毒 HA 蛋白与唾液酸受体的重要蛋白残基；初步了解流感病毒如何影响 细胞自噬的信号通路。 4. 获得目的重组病毒；建立人冠状病毒库；揭示不同突变对病毒 RNA 翻译和复制的影响；获得宿主细胞 miRNA与病毒 miRNA 表达谱。 5. 筛选出 26 种分别与流感病毒和汉坦病毒相互作用的宿主限制性因子；阐明部分宿主限制性因子对流感病毒和汉坦病毒复制的影响及其作用机制；获得狂犬病病毒感染前后宿主在蛋白质水平的差异点 6. 明确高致病性禽流感病毒对在HLAA2/DR HLAA11/DR1 转基因小鼠体内感染特性，初步揭示 MHC限制性在高致病性禽流感病毒跨物种感染过程中的作用； 完成新型病毒的基因组测序，利 用生物信息学方法并发现嗜神经性相关毒力位点，通过反向遗传学手段进行验证。 7. 发表研究论文 20 篇以上 研究内容 预期目标 第 三 年 1. 对检测为阳病毒性的进行病毒分离培养；开展新分类病毒的细胞和动物敏感性实验，评价病毒的宿主范围和对实验动物的致病能力。 2. 继续进行病毒分子流行病学的调查与研究，分析病毒的进化和变异规律；利用构建的反向遗传操作技术平台，研究病毒基因点变异、基因突变、基因重配等对病毒致病性和传播性的影响，重点探讨影响病毒传播特性尤其是跨种间传播特性的关键因子或因素。 3. 在细胞模型上对筛选的乙脑病毒、登革病毒候 选受体进行进一步的验证；流感病毒突变体的表达纯化、与唾液酸受体复合体的晶体结构；在细胞模型上研究自噬影响流感病毒侵入的分子机制。 4. 流感病毒在不同宿主中的复制及跨种属传播机制；冠状病毒在不同宿主中的复制及跨种属传播机制；登革病毒在不同宿主中的复制及跨种属传播机制；病毒在不同组织中复制的 miRNA表达谱对病毒复制的调控及分子机制； 5. 继续探索宿主限制性因子在流感病毒及汉坦病毒复制过程中的调控机制；探索弱毒诱导的早期抗感染因子（宿主限制性因子）的本质和强毒诱导的早期致病因子对宿主限制性因子的影响； 6. 病毒体内分布实 时监测动物模型构建； 新型病毒嗜神经性相关毒力位点的功能研究。 1. 获得 35 株新分离病毒的全基因组序列 ； 揭示野生动物或家畜冠状病毒的遗传变异情况。 2. 建立病毒的毒株库和基因库；确定影响病毒致病性和传播性的关键基因位点。 3. 获得 12 个乙脑病毒、登革病毒受体或辅助受体；从分子结构水平揭示流感病毒 HA 蛋白与唾液酸受体相互作用影响流感病毒跨种间传播的机制；阐明流感病毒表达蛋白如何影响细胞自噬水平。 4. 揭示病毒在不同宿主上生长能力的动态变化；获得人冠状病毒感染性克隆；获得四种病毒 RNA 上的细胞蛋白因子。 5. 深入阐明宿主限制性 因子在流感病毒及汉坦病毒复制过程中的调控机制；筛选出 12 个与狂犬病病毒相互作用的宿主限制性因子。 6. 通过转基因技术获得流感病毒体内分布实时监测动物模型； 通过细胞学和动物学实验，初步阐明新型病毒嗜神经性相关毒力位点的作用机制 7. 发表研究论文 20 篇以上 研究内容 预期目标 第 四 年 1. 研究新型病毒的受体及其跨种物种感染的分子机理研究； 分析我国汉坦肾出血热疾病主要疫区疾病流行情况与病毒遗传变异的关系；检测犬流感病毒的流行情况。 2. 持续进行病毒的分离，密切关注动物临床和人医临床新型病毒的出现和新型病毒的基因组特征；并利用构建的反向遗 传操作技术平台，研究病毒基因。