浅谈博士后基金申请

浅谈博士后基金申请内容摘要：

使用时的效果。 标题 拟采取的研究方法 详细叙述或引用文献 5. 技术路线（标出基础，不能太复杂） 例一 研究方案 1） 蛋白质亚细胞定位： GmNAC2 与 GFP 基因融合后的Gateway 载体 pMDC44 系列 (Curtisamp。 Grossniklaus,2020,Plant Physi, 133:462469), 用农杆菌介导的方法进行洋葱表皮细胞的瞬时表达，结合激光共聚焦显微镜分析，研究 GmNAC2 编码产物的亚细胞定位。 2）蛋白质转录活性分析 3）基因表达分析（原位杂交） 4）转基因大豆的获得与分析 5）基因芯片分析 6） GmNAC2 和 GmNAC5 下游基因的鉴定 7）蛋白质组分析 从研究内容的角度进行阐述，不要与研究方法重复 • 目前有关 NAC 基因在大豆种子发育过程中功能尚不清楚，但申请者已克隆了两个可能与种子发育相关的 NAC 基因，为进一步研究准备了基础材料和信息。 • 转基因大豆的培育是本项目实施的重要环节，本实验室经过 10 多年的摸索，已经建立了较稳定大豆遗传转化体系，经 Southern 杂交验证，可以获得 1%左右的转化效率（ Yi amp。 Yu, 2020）。 此外 , 我们也在大豆上建立了基因过量表达和 RNAi技术转基因体系（ 易新萍，南农博士论文 , 2020）； • 通过基因芯片技术大规模研究差异表达基因，由于商品化大豆基因芯片产品（ Affymetrix）的问世和推广而更加容易 , 应用基因芯片，本实验室也开展了大豆不同器官间的差异表达基因的研究 (黄方等 , 未发表资料 )； • 本实验室已经通过蛋白质组技术研究了大豆种子发育过程中差异表达蛋白质的变化规律（郑蕊， 2020），还研究了种子萌发过程中蛋白质组成的变化（徐晓燕等， 2020）。 上述分析表明，本项目具有较好的基础和技术贮备，研究内容和方案是切实可行的。 可行性分析 研究方案及可行性分析 （一）突变基因的精细定位 （ 1）基于微卫星标记的初步定位。 对 ZC lpa21 基因，我们利用突变种质与亲缘较远的非低植酸常规品种的杂交后代群体，将其定位在 B2 连锁群与Satt416 相距 的位置上。 进一步将通过扩大分离群体单株数目，利用新的在 Satt416 区段有更多多态性标记的定位群体，提高定位精度，获得更加紧密的微卫星标记。 对 TW lpa12 基因，将采用与 ZC lpa21 基因定位相似的办法完成初步定位。 （ 2）新的分子标记的开发与基因精细定位。 开发新的 SNP和 CAPS 标记 ,利用分离群体分析单株的基因型，从而找到连锁更加紧密的分子标记。 （ 3）定位群体与种子表现型鉴定。 本研究将利用以下杂交组合的分离群体进行基因定位。 TWlpa12 浙春 3 号（已有组合）、 TW lpa12 中豆 27（已有组合）、 TW lpa12 浙鲜豆 2 号（计划使用）。 种子的低植酸性状，采用高无机磷（ HIP）筛选技术进行间接确定（袁凤杰等， 2020）。 （二）低植酸突变对农艺、品质性状的影响。 利用用于定位的 TW lpa12 和 ZC lpa21 遗传群体，每个组合培育 HIP 纯合型和野生纯合型 F5 家系各 60 个，随机取 15 个家系混为一组，这样每个组合各有三组 HIP 纯合型和野生纯合型材料，每个突变基因各有六组 HIP 纯合型和野生纯合型材料。 将这六组材料按随机区组设计分别在杭州春、秋两季，海南冬春季节种植。 按标准方法考察如下，特性，通过统计分析，确定两个突变基因对这些性状在不同环境条件下的影响。 考察的农艺性状包括小区产量和产量组成因素，如单株荚数、单株粒数、单株重和百粒重等。 种子收获后按标准方法对蛋白含量、油份含量和脂肪酸组成、异黄酮和低聚糖含量进行分析。 （三）突变基因的聚合和分析 从提高种子中营养元素的有效性和保护环境环境的角度，植酸含量下降越多效果越明显；然而植酸在植物的生长发育中有着重要的生理功能，因此，研究植酸下降的幅度与植株是否能够正常生长的关系，十分重要。 本试验将利用分子标记（其中 TW lpa12 采用根据 2bp 缺失设计的特异性标记， Yuan 等 2020），在 TW lpa12 和 ZC lpa21 两个突变种质的杂交后代（ F3 或 F4）中选择两个突变基因均为纯合的株系。 通过对此类材料植酸含量的分析，探明两个突变组合在一起对植酸合成的影响程度。 在此基础上，通过分析双突变纯合株系材料的农艺和品质性性状，确定两个突变基因组合使用的育种价值（方法同 2：低植酸突变对农艺、品质性状的影响） • 本试验涉及的研究项目，除精细定位外，我们已开展了前期研究，完成了材料、方法和技术平台的构建，因此，完成实验计划应该不存在技术上的困难。 • 基因精细定位部分，如前所述，大豆分子遗传学和基因组学研究日新月异，在未来的几年中会有更多的信息可以帮助建立起更有效的方法、技术，采用更加有效的策略完成预定任务。 • 我们根据现有的基因组信息，提出新标记开发和精细定位的策略，在执行过程中应该也不会遇到无法克服的困难，但有可能工作量会比较大，无法达到非常精细的地步。 但我们制定的目标是获得遗传距离小于 1cM的标记，这是完全可能的，其他研究者也已经有类似的报道。 • 申请者研究小组已有几十年大豆育种和相关基础研究的历史，拥有一支经验丰富，实力较强的研究队伍，浙江大学作为合作单位，增强了基础理论研究的力量；建设于我院的国家大豆改良分中心实验室已经建成并投入使用，其品质分析和分子生物学研究所需仪器较齐全；同时大棚、晒场和试验基地等基础设施良好，这些都为本项目的开展和实施提供了保障。 可行性分析 ： 8. 研究计划及预期研究进展 受理项目 1 • 1） •。