川麦42不同逆境生长情况研究开题报告(编辑修改稿)

川麦42不同逆境生长情况研究开题报告(编辑修改稿)内容摘要：

反应系统总体积为 3 mL。 其中 4～ 8号管中磷酸缓冲液和酶液的加入量依样品中的酶活性进行调整，如果酶活性强时，可适当减少酶液用量。 试剂全部加入后混匀，将 1号杯置于暗处，其余各杯均于 25 ℃ 、 4000 lx日光灯下反应 20 min，各管受光情况要一致。 温度高时，时间缩短；温度低时，时间延长，然后立即遮光停止反应。 反应中各试剂用量如下表所示 ： 130 mmol/LMet（ mL） 750 μmol/LNBT（ mL） 100 μmol/LEDTA 二钠（ mL） 20 μmol/L核黄素（ mL） 酶 液(μL) 蒸馏水 (mL) 1 2 3 4 5 6 7 8 0 0 0 5 10 15 20 25 在 560 nm波长下，以 1号杯调零，测定其余各杯反应体系的 光密度。 以 3号杯吸光度的平均值作为还原率的 100％，分别计算不同酶液量抑制 NBT光还原的相对百分率。 以酶液用量为横坐标，以 NBT光化还原的抑制率 (％ )为纵坐标绘制二者相关曲线， NBT光化还原被抑制 50％的酶 5 液量为一个酶活单位。 SOD总活性 [U/g]=SCKTEWVA )A( CK  SOD比活性 [U/mg]=蛋白质含量 总活性SOD 过氧化物酶体（ POD）的测定 酶液制备 称取新鲜小麦叶片 g，剪碎，放入预冷的研钵中，加入适量预冷的磷酸缓冲液冰浴研磨成匀浆。 残渣再用 5mL磷酸缓冲液提取一次，合并两次匀浆液，以 4000 r/min低温离心 15 min，上清液即为粗酶液，定容至 25 mL，酶液贮于低温下备用。 酶活力测定 ：采用愈创木酚法测定 [15] 取 2支试管，于 1支中加入反应混合液 3 mL。 和磷酸缓冲液 1 mL，作为对照，另 1支中加入反应混合液 3 mL，和上述酶液 1 mL。 (如酶活性过高可稀释之 )。 迅速将两支试管中溶液混匀后，倒人比色杯，置于分光光度计样品室内，立即开启秒表记录时间，于 470 nm处测定 光密度 ，每隔 30 s读数一次。 过氧化氢酶（ CAT）的测定 酶液制备 称剪碎混匀的小麦叶片 g置于预冷的研钵中，加适量磷酸缓冲液及少量石英砂，在冰浴上研磨匀浆，转移至 25 mL容量瓶中，用磷酸缓冲液冲洗研钵 23次 (每次 l2 mL)，合并冲洗液于容量瓶中，定容至 25 mL，摇匀。 取提取液 5 mL于离心管中，在 4 ℃ 、 15000 r/min 下离心 15 min，上清液即为酶提取液， 4 ℃下保存备用。 CAT 活性的测定 ：采用紫外分光光度法 [15] 取 10 mL 具塞试管，加 2 mL 酶提取液于沸水浴中加热煮致失活，冷却备用。 取 10 mL 试管 4 支， 3 支为测定 (3 个重复 )， 1 支为对照，按下表加入试剂。 1 2 3 4 TrisHCl 酶提取液 蒸馏水 （高温失活） 将上述 4支试管于 25 ℃水浴中预热 3 min 后，逐管加入 mL 100 mmol/L H2O2溶液，每 6 加一管立即在紫外分光光度 计 上测定 A240(蒸馏水调零 )，每隔 30 s 读数一次，共测 4 min，记录4 支试管的测定值。 总蛋白含量的测定 可溶性蛋白质的提取 取 g小麦幼苗叶片，放入研钵，加 10 mL蒸馏水在冰浴中研成匀浆，再在 4000 r/min离心 10 min，将上清液倒入 10 mL容量瓶，再向残渣中加 4 mL蒸馏水，悬浮， 4000 r/min离心 10 min并合并上清液，定容至刻度。 蛋白质含量的测定：采用考马斯亮蓝 G250 法测定 [16] 标准曲线的制作 取 6支试管，编号，按下表加入试剂。 1 2 3 4 5 6 蛋白质标准溶液 /mL 蒸馏水 /mL 考马斯亮蓝试 剂 /mL 蛋白质含量 /μg 0 5。