实时荧光定量pcr技术的原理及应用realtimequantitative内容摘要:

ve Quantification, RQ) 基因在不同组织中的表达差异 药物疗效考核 耐药性研究 绝对定量与相对定量的定义 绝对定量通过标准品定量 绝对定量的标准样品: 已知拷贝数的质粒 DNA,做系列稀释。 标准样品的种类:  •含有和待测样品相同扩增片段的克隆质粒  •含有和待测样品相同扩增片段的 cDNA  •PCR的产物 绝对定量:从荧光到拷贝数 相对定量通过内标定量 内标( Endogenous Control)通常是 βactin、GAPDH基因等看家基因 在细胞中的表达量或在基因组中的拷贝数恒定,受环境因素影响小 内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量 相对定量:参照因子 Calibrator 相对定量分析方法 1 ΔΔCt 前提:目标序列和内参序列的扩增效率接近 100%且偏 差在 5%以内 用内参基因的 CT值归一目标基因的 CT值: ΔCT( test)= CT ( target,test) CT。
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