食品药品监督管理毕业设计

食品药品监督管理毕业设计内容摘要：

/min 流 速分离最为满意 ( 保留时间为 7． 00 min)。 实验中还发现 ， 前一个样品测试完成后马上进样 第二个样品 ， 会使基线升高 ， 干扰峰增多 ， 被测组分不 能分离 ， 主要是由于采用乙腈 ∶ 水 ( v ∶ v， 4 ∶ 96) 等度洗 脱时 ， 干扰组分在 20 ～ 25 min 流出 ( 样品运 行时间为 10 min) ， 正好对后面的样品测定形成干扰。 在丙烯酰 胺色谱峰完全流出后 ， 通过提高流动相中乙腈比例 ( 4． 0%上升到 100． 0%， 梯度洗脱程序 ) 和加大流速 ( 4． 0 mL /min) ， 一方面缩短干扰峰的保留时间 ， 另一 方面清洗了色谱柱 ， 降低了柱头压并活化了色谱柱 ， 从 而缩短了进样间隔 ( 30 min) ， 提高了分析效率。 2． 3 固相萃取条件的选择 SPE 柱净化是目前较多采用的前处理方式 ， 一般 需要合并使用多根 SPE 柱。 经比较了 Oasis HLB 和 Anpeleclean MEP ( 上海安谱科学仪器有限公司 ) 与 Oasis MCX SPE 柱联合净化的效果 ， 发现 HLB 与 MCX 联合净化的回收率可达 98． 2%， 而 MEP 与 MCX 联合 净化的回收率仅为 62． 3%。 同时比较了不同洗脱剂 的效果 ， 用甲醇洗脱时色谱峰干扰较多 ， 很难得到满意 的丙烯酰胺色谱峰 ， 用水洗脱时干扰较少 ， 被测组分峰 可达到很好的基线分离 ( 图 如下 )。 2． 4 标准曲线线性及检出限 将丙烯酰胺标准品用纯水配制成 0． 0 0． 0． 0． 0． 0． 50、 1． 00、 2． 00 μ g /mL 的标准溶液 系列 ， 按确定好的高效液相色谱条件测定 ， 在 0． 05 ～ 2． 00 μ g /mL 浓度范围内呈线性关系 ， 标准曲线的相关系数为 0． 9995。 检出限和定量检出限经 3 倍和 10 倍 信噪比计算分别为 10 μ g /kg 和 31 μ g /kg( 图 如下 ) 2． 5 加标回收率和精密度 取高 、 低 2 种浓度的样品各 5 份 ， 分别加入 1 000 μ g /kg 标准品 ， 经计算平均加标回收率为 98． 2%， 相对标准偏差 ( RSD) 为 7． 8% ( 图 如下 )。 同一 样品连续测定 3 d 的日间 RSD 为 4． 3%。 1． 标准 2． 样品 3． 加标样品 2． 6 质控样测定 对 FAPAS 饼干质控样 ( T3021， 英国 ) ， 经平行处 理 5 个样品的测定结果为 ( 747． 0 177。 58． 0) μ g /kg， 符合 质控样的真实值 862( 580 ～ 1144) μ g /kg， 说明整个测 定方法准确度是可靠的。 2． 7 样品测定 测定了 16 份薯片 ( 条 ) 及饼干类市售食品 ， 每个 样品平行测定 3 次 ， 丙烯酰胺的平均含量范围为 93 ～ 1 325 μ g /kg， 其中薯 片 ( 条 ) 的平均含量为 596 μ g /kg， 高于饼干的平均含量 270 μ g /kg(如下） 薯片 ( 条 ) 及饼干中丙烯酰胺的含量 ( x－ 177。 s) 样品名称丙烯酰胺含量 ( μ g /kg) 巴西烧烤味立体脆 326 177。 21 烧烤味薯片 545 177。 19 田园薯片 879 177。 62 番茄味薯片 635 177。 33 甘薯片 460 177。 41 油炸薯片 1325 177。 102 炸薯条 ( 快餐店 ) 650 177。 45 小小酥 465 177。 32 香辣味麦烧 125 177。 10 蔬菜梳打饼干 325 177。 20 美味酥 164 177。 8 无 添糖消化饼干 450 177。 19 小丸煎饼 106 177。 8 牛奶芒果味饼干 152 177。 13 夹心威化饼干 93 177。 6 饼干 552 177。 23 3 讨论 丙烯酰胺在水中的溶解度很大 ( 2 155 g /L) ， 水是 理想的提取溶剂 ， 用水提取还可以去除油炸食品中大 量有机物。 在提取过程中为避免糊化和丙烯酰胺变 性 ， 不宜加热 ( 温度不超过 40℃ ) 和超声提取 ［ 6］， 而且 加热或超声波震荡可产生微小颗粒堵塞固相萃取柱 ( SPE) ， 降低净化效率。 对于富含脂肪的样品 ， 需要先 用正己烷去脂。 本次研究发现 ， 去脂后的样品或脂肪 含量较少的样品在 0℃ 14 500 179。 g 高速离心后 ， 少量脂 肪层被固化 ， 可以轻易被去除 ， 简化了提取步骤 ， 大大 提高了提取效率和消除干扰。 在色谱分析过程中运用 梯度洗脱程序快速去除脂溶性干扰物质并活化了色谱 柱 ， 从而缩短进样间隔 ， 提升了分析效率。 丙烯酰胺的最佳分析方法应是 GC － MS 或 LC － MS 法 ， 但仪器比较昂贵且分析要求高 ， 不易推广应用。 本法采用了 FAPAS 饼干质控样 ， 其基质与被测样品相 似 ， 质控样的真值包括了 GC － MS 和 LC － MS 等方法 的测定结果。 本法测定的结果完全符合 质控样要求 ， 避免了待测样品假阳性结果的出现 ， 保证了整个测定 方法的准确可靠。 178。 38178。 霉菌计数 1 范围 本标准规定了食品中霉菌和酵母菌（ moulds and yeasts）的计数方法。 本标准适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 冰箱： 2℃ ～ 5℃。 恒温培养箱： 28℃177。 1℃。 均质器。 恒温振荡器。 显微镜： 10179。 ～ 100179。 电子天平：感量 g。 无菌锥形瓶 :容量 500 mL、 250 mL。 无菌广口瓶： 500 mL。 无菌吸管： 1 mL(具 mL 刻度 )、 10 mL(具 mL 刻度 )。 无菌平皿：直径 90 mm。 无菌试管 : 10 mm179。 75 mm。 无菌牛皮纸袋、塑料袋。 3 培养基和试剂 马铃薯 葡萄糖 琼脂培养基 孟加拉红培养基 4 操作步骤 样品的稀释 固体和半固体样品：称取 25 g 样品至盛有 225 mL 灭 菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为 1:10 稀释液。 或放入盛有 225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打 2min，制成 1:10 的样品匀液。 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品至盛有 225 mL 无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 取 1 mL 1:10 稀释液注入含有 9 mL 无菌水的试管中 , 另换一支 1 mL 无菌吸管反复吹吸 ,此液为 1:100 稀释液。 按 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。 每递增稀释一次，换用 1 次 1 mL 无菌吸管。 根据对样品污染状况的估计，选择 2 个～ 3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）， 在进行 10 倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取 1 mL 样品匀液于 2 个无菌平皿内。 同时分别取 1 mL 样品稀释液加入 2 个无菌平皿作空白对照。 及时将 15 mL～ 20 mL 冷却至 46℃ 的马铃薯 葡萄糖 琼脂或孟加拉红培养基 (可放置于 46℃177。 1℃ 恒温水浴箱中保温 )倾注平 皿，并转动平皿使其混合均匀。 培养 待琼脂凝固后，将平板倒置， 28℃177。 1℃ 培养 5d，观察并记录。 菌落计数 肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。 以菌落形成单位（ colony forming units， CFU）表示。 选取菌落数在 10 CFU～ 150 CFU 的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。 霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。 菌落数应采用两个平板的平均数。 5 结果与报告 计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释 倍数计算。 若所有平板上菌落数均大于 150 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多 不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 若所有平板上菌落数均小于 10 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于 1 计数。 报告 菌落数在 100 以内时，按 四舍五入 原则修约，采用两位有效数字报告。 菌落数大于或等 于 100 时，前 3 位数字采用 四舍五入 原则修约后，取前 2 位数字，后面用 0 代替位数来表示结果；也可用 10 的指数形式来表示，此时也按 四舍五入 原则修约，采用两位有效数字。 称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以 CFU/mL 为单位报告，报告或分别报告霉菌和 /或酵母数。 志贺氏菌检验 1 范围 本标准规定了食品中志贺氏菌 (Shigella) 的检验方法。 本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他 设备和材料如下： a） 恒温培养箱： 36 ℃177。 1 ℃； b） 冰箱： 2 ℃～ 5 ℃； c） 膜过滤系统； d） 厌氧培养装置： ℃177。 ℃； e） 电子天平：感量 g； f） 显微镜： 10179。 ～ 100179。 ； g） 均质器； h） 振荡器； i） 无菌吸管： 1 mL（具 mL 刻度）、 10 mL（具 mL 刻度）或微量移液器及吸头； j） 无菌均质杯或无菌均质袋：容量 500 mL； k） 无菌培养皿：直径 90 mm； l） pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸； m） 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 志贺氏菌增菌肉汤 新生霉素。 麦康凯（ MAC）琼脂。 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（ XLD）琼脂。 志贺氏菌显色培养基。 三糖铁（ TSI）琼脂。 营养琼脂斜面。 半固体琼脂。 葡萄糖铵培养基。 尿素琼脂。 3 β 半乳糖苷酶培养基。 氨基酸脱羧酶试验培养基。 糖发酵管。 西蒙氏柠檬酸盐培养基。 粘液酸盐培养基。 蛋白胨 水、靛基质试剂。 志贺氏菌属诊断血清。 生化鉴定试剂盒。 操作步骤 增菌 以无菌操作取检样 25 g（ mL），加入装有灭菌 225 mL 志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以 8 000 r/min～ 10 000 r/min 均质；或加入装有 225 mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质 1 min～ 2 min，液体样品振荡混匀即可。 于 ℃177。 １℃，厌氧培养 16 h～ 20 h。 分离 取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于 XLD琼脂平板和 MAC 琼脂 平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于 36 ℃ ℃培养 20 h～ 24 h，观察各个平板上生长的菌落形态。 宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。 若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至 48 h 再进行观察。 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表 1。 表 1 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 志贺氏菌的菌落特征 MAC 琼脂 无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐 XLD 琼脂 粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐 志贺 氏菌显色培养基 按照显色培养基的说明进行判定 初步生化试验 自选择性琼脂平板上分别挑取 2 个以上典型或可疑菌落，分别接种 TSI、半固体和营养琼脂斜面各一 管，置 36 ℃ ℃培养 20 h～ 24 h，分别观察结果。 凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗糖）、不产气（福氏志贺氏菌 6 型可产生少量气体）、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取其 中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。 生化试验及附加生化试验 生化试验 用 中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验，即β 半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨。