毕业论文__硒化乳酸菌胞外多糖理化性质及其抗氧化活性研究

毕业论文__硒化乳酸菌胞外多糖理化性质及其抗氧化活性研究内容摘要：

可以看出，硒化乳酸菌胞外多糖在水中呈均匀溶解状态，而在乙醇和丙酮中沉于底部，在氯仿中呈漂浮状态，说明乳酸菌胞外多糖不溶于乙醇，丙酮和氯仿等有机溶剂。 多糖的鉴别与分析 淀粉多糖遇碘变蓝，因此可以用碘检测淀粉多糖。 取 lml 浓度为 1mg／ ml的硒多糖溶液加入碘 碘化钾溶液，观察颜色变化。 以蒸馏水作阴性对照，淀粉溶液 (1mg／ m1)作阳性对照。 结果表明，硒多糖溶液碘 碘化钾反应呈阴性，说明不含有淀粉多糖。 糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物与 α萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和 浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。 自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。 此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸以及丙酮、甲酸和乳酸均呈颜色近似的阳性反应。 因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。 取 lml 浓度为 lmg／ ml的硒多糖溶液，加入 2 滴 Molish 试剂，摇匀，将试管倾斜，沿试管壁慢慢加入 lml 浓硫酸，竖直试管，观察浓硫酸和糖溶液交界面颜色变化。 以蒸馏水作为阴性西安培华学院本科毕业论文（设计） 硒化乳酸菌胞外多糖理化性质及其抗氧化活性研究 4 对照，淀粉溶液 (1mg／ m1)作为阳性对照。 结果表明，硒多 糖溶液的 Molish反应呈阳性，说明硒多糖很可能为多糖。 ① 单糖标准溶液的配制 分别称取葡萄糖、鼠李唐、木糖、果糖、半乳糖、甘露糖，分别溶于蒸馏水中制得五种单糖标准液，浓度均为 1mg/mL。 ② 水解多糖样品的制备 称取 20mg 硒 多糖，溶解在 5mL 蒸馏水中，加入 12mol/L 的 HCl ,置于高压釜中，在 121℃ 条件下水解 4h，中和后稀释至 10mL，离心。 ③ 展开系统及显色剂的配制 展开系统：分别把乙酸乙酯、吡啶、无水乙醇、水按 8： 1： 1： 2（ V/V） 的比例混合摇匀。 显色剂的配制（苯胺 二苯胺 磷酸显色剂）： 2%二苯胺丙酮溶液： 2%苯胺丙酮溶液： 85%磷酸按 5： 5： 1（ V/V） 的比例混合摇匀。 ④ 点样 将葡萄糖 、鼠李唐、木糖、果糖、半乳糖、甘露糖的单糖标准液和处理过的样品液，7 种液体按顺序分别点样在薄层板上。 点样量约 10μL,分次滴加，使点样扩散后直径不超过 2mm。 点样过程中用吹风机使样品干燥。 ⑤ 展开 将点好样品的薄层板置于密闭的层析缸中，用配制的展开剂，采用倾斜上行法，将薄层板的下端浸在展开剂中 ，至展开剂距离薄层板的上端约 1cm 左右时取出自然风干。 ⑥ 显色 在除去溶剂后的薄层板上，均匀喷上显色剂，置于烘箱中显色，烘箱中加热显色温度一般选择 85℃ 为宜，显色时间 10min。 ⑦ Rf 值的测 定 西安培华学院本科毕业论文（设计） 硒化乳酸菌胞外多糖理化性质及其抗氧化活性研究 5 本实验的硅胶板购自 南京建成生物工程研究所，展层显色后 ，结果如下图 21 所示 图 21 硅胶板薄层色谱 （从左至右依次为葡萄糖、鼠李唐、木糖、果糖、半乳糖、甘露糖、水解多糖） 表 21 乳酸菌胞外多糖的组分 葡萄糖 鼠李唐 木糖 果糖 半乳糖 甘露糖 标准品 样品 Rf= － Rf= － Rf= － Rf= － Rf= ＋ Rf= ＋ 从表 21的 Rf值表中可以看出，样品中出现的两个显色点的 Rf值为 ，跟半乳糖和甘露糖的 Rf值一致， 说明硒化乳酸菌胞外多糖的单糖组分中包括半乳糖和甘露糖。 体外抗氧化活性的测定 对超氧阴离子自由基（ O2 ）清除能力的测定 采用 邻苯三酚自氧化法 ，邻苯三酚在碱性条件下发生自氧化，释放出 O2，生成有色的中间产物，可用分光光度法进行测定，当有清除剂存在时， O2被清除，从而阻止中间产物的积累，使邻苯三酚自氧化速率降低，表现为体系的吸光度降低，所以可通过比色法检测有色中间产物的含量，进而检验待测物质清除 O2的能力，因此入一定量的具有抗氧化作用的不同浓度的多糖液可对 O2产生不同的抑制作用，进而导致光吸收值的变化。 配制 50mmol/L TrisHCl缓冲液（ pH=）， 3mmol/L的邻苯三酚溶液和不同浓度的样品溶液。 取浓度为 50mmol/L TrisHCl缓冲液（ pH =） ，加蒸馏水 mL，混匀后西安培华学院本科毕业论文（设计） 硒化乳酸菌胞外多糖理化性质及其抗氧化活性研究 6 在 25℃水浴保温 20min，取出后立即加入样品 2 mL，蒸馏水 mL， 25℃保温的、浓度为 3mmol/L 的邻苯三酚 mL（以 10mmol/L HCl配制，空白管中以 10mmol/L HCl代替邻苯三酚溶液），迅速摇匀倒入比色杯，置于 25℃恒温池中，在 325nm下每隔 30s测一次；测启动后 4min 内样品抑制邻苯三酚自氧化的速率，记作 V 样 ，测空白样反应启动后 4min 内邻苯三酚自氧化的速率，记作 V0。 每测一个浓度配一次测样液，而且配完了就要马上测定，否则反应结 束了就没法测速率了。 超氧阴离子自由基 (O2)是在生命活动过程中起重要作用的自由基，具有很强的氧化能力，国内外学者大量研究表明一些富含多酚类、黄酮类、皂贰类、翰质类、生物碱类、多糖类等成分的天然食物有较强的抗氧化能力。 经过多次实验，对比，优化，选择之后，选取浓度 ， ， ， ， 1， 2， 4， 8mg/mL8个浓度的测定结果，经数据处理后得硒多糖与未硒化多糖在相同浓度范围内清除超氧自由基 （ O2） 清除率比较结果，如下图22所示。 图 22 硒化与未经硒化乳酸菌胞外多糖对超氧自由基（ O2）的清除作用 从图 22可以看出硒化乳酸菌胞外多糖和未经硒化的乳酸菌胞外多糖对超氧自由基都具有清除能力，且其清除率都随浓度的增加增强，在每一浓度下硒化乳酸菌胞外多糖都比未经硒化的乳酸菌胞外多糖对 超氧自由基（ O2）的清除作用强 ；在低浓度，约 1mg/mL之前，硒化多糖的清除率比未硒化多糖的清除率有上升的趋势，随后就慢慢接近平行。 当多糖浓度达 4mg/mL 以上时，硒化乳酸菌胞外多糖对超氧自由基 （ O2） 清除率可以达到 50%以上。 硒化乳酸菌胞外多糖在选定范围内，对超氧自由基 （ O2） 的清除率逐渐增加，最高为 %，相比硒化前的多糖在同样浓。