产品设计论文甘草不同提取部位对a-葡萄糖苷酶活性的影响内容摘要:
能抑制蛋白及脂类糖基化 [8]。 具有抗癌、抗 HIV 病 5 毒、抗鼠白血病病毒、抗动脉粥样硬化等作用 [911]。 因此开发新型 α 一葡萄糖苷酶抑制剂引起了研究者们极大的兴趣。 近年来,随着糖尿病患者数量的逐年攀升,采用饮食疗法. 定期服用降糖功能食品并作为糖尿病治疗的辅助治疗方案已得到世界各国的认同 [12]。 据国际糖尿病联盟 2020 年最新统计数据: 2020 年在世界范围内大约有 2. 85 亿糖尿病患者。 糖尿病已成为全球第四大导致死亡的疾病。 我国目前有 9 000 多万糖尿病患者 (2020 年最新数据 )。 在饮食疗法基础上配合运动治疗、药物治疗等整体治疗方案。 有利于减少糖尿病发病率及死亡率 [1314]。 开发新型、价廉、有效的预防或治疗糖尿病的功能性食品具有重要意义。 研究的目的和意义 本研究利用提取、分离技术,从甘草中提取出不同的提 取物( 总生物碱、总皂苷、总黄酮和总多糖 ),并进行定性鉴定后,测定甘草不同提取部位对 a葡萄糖苷酶活性的影响 ,为开发利用甘草资源提供理论和实验依据。 2. 材料与仪器 药材 甘草 (购于兰州黄河中药材市场 ) 试剂 乙醇,硫酸溶液,浓氨水,浓盐酸,乙酸乙酯,氯仿,蒸馏水,水饱和的正丁醇,苯酚,碘铋化钾,磷酸一氢钠,磷酸二氢钠 , 十二烷基硫酸钠, a葡萄糖苷酶溶液, PNPG,所有试剂均为分析纯。 仪器 紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司 752N) 电子天平(长 沙湘平科技发展有限公司 ES2020H) 电子分析天平(梅特勒 托利多仪器上海有限公司 AB104N) 数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司 HH2 ) 高速离心机(常州国华电器有限公司 XYJ2) pH 计(上海精密科学仪器有限公司) 6 循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司) 旋转蒸发仪 RE52(上海亚荣生化仪器厂) 全波长扫描仪 量筒、移液枪,圆底烧瓶、烧杯、回流冷凝管、滤纸、布氏漏斗、抽滤瓶、分液漏斗 旋转蒸发器 3. 实验方法 甘草 中 各种成分的提取 甘草生物碱的提取 称取 甘草 细粉 50g,加入 500ml 乙醇,加热回流 2 小时,纱布过滤,滤渣再用 300ml 乙醇提取 2小时,纱布过滤,合并过滤,抽滤除去不溶性杂质,滤液浓缩至浸膏状约 30ml,用 1%硫酸溶解调PH 为 34,静止过夜,滤液用浓氨水调 PH 到 10, 抽滤,氯仿 萃取 3 次,蒸干,得总生物碱。 避光,冷藏,待用做分定性检测及酶动力学测定。 甘草黄酮的提取 称取 甘草 细粉 50g,加 500ml 乙醇,加热回流 2 小时,用纱布过滤,滤渣用 500ml 乙醇再次加热回流 2 小时, 用纱布过滤,合并滤液,抽滤除去不溶性杂质,浓缩滤液至 30ml,分别用氯仿,乙酸乙酯, ,乙酸乙酯层萃取得黄酮类物质,干燥得总黄酮。 避光,冷藏,待用做组分定性检测及酶动力学测定。 甘草皂苷的提取 称取 甘草 细粉 50g,用乙醇 500ml 加热回流 2h,趁热抽滤,滤渣再用乙醇 500ml,加热回流 2h,趁热抽滤。 合并滤液,抽滤除去不溶性杂质,浓缩滤液至 30ml,分别用氯仿,乙酸乙酯,水饱和的正丁醇进行萃取,正丁醇层浓缩至干得皂苷物质。 避光,冷藏,待用做组分定性检测及酶动力学测定。 7 甘草 多糖的提取 取粉碎的甘草根粉 50g, 加 水 煮沸 2 次 ,纱布 过滤,合并滤液, 离心, 浓缩, 加入 4 倍体积的乙醇静止过夜, 多糖析出 , 倒出乙醇 , 在水浴锅上加热至乙醇挥发完全 60℃ 干燥得甘草多糖粗品。 sevag 法 除蛋白 ,水层加入 4 倍量乙醇沉淀,滤取沉淀物,依次乙醇,无水乙醇洗涤,除去脂溶性成分和水分,干燥即得多糖。 避光,冷藏,待用做组分定性检测及酶动力学测定。 甘草 中各提取物的定性检测 多糖的定性鉴定 :浓硫酸 苯酚反应 样品 +6%苯酚 +浓硫酸 → 红色。 皂苷的定性鉴定 :皂苷 +氯仿 +浓硫 酸实验 → 氯仿层呈现红色或蓝色 , 硫酸层有绿色的荧光。 生物碱的定性鉴定 :碘化铋钾显色 → 生物碱 +碘化铋钾 → 显红色 , 橙红色。 黄酮的定性鉴定 : 浓氨水反应 样品 +浓氨水 → 亮黄色 , 或橙 红 色。 α 葡萄糖苷酶活性测定和各物质对α 葡萄糖苷酶抑制活性的测定 α 葡萄糖苷酶活性的测定 取 1 组带塞的试管,编号 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 反应体系组成如表一,在 37℃下分别反应 3, 6,9, 12, 15, 20, 30min 后,以 5%十二烷基硫酸钠终止反应,在 405nm 下测定其吸光度。 同时。产品设计论文甘草不同提取部位对a-葡萄糖苷酶活性的影响
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