sopyz00107微生物限度检验方法验证方案

sopyz00107微生物限度检验方法验证方案内容摘要：

JiLinGuoYuan 微生物限度检验方法 验证方案 第 7/16 页 试验组的菌回收率＝ 稀释剂对照组平均菌落数 100% 菌液组的平均菌落数 计数方法验证至少应进行 3 次独立平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。 结果判断 在 3 次独 立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率） ≥70%。 若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率） ≥70%。 照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌回收率低于 70%，应采用自然沉降法、培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证，使试验组菌回收率大于 70%。 当建立药品的微 生物限度检查时，应进行控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的的控制菌检查方法测定。 若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检验方法应进行重新验证。 验证试验也可与供试品的控制菌检查同时进行。 验证用菌株 大肠埃希菌（ Esherichia coli）【 CMCC(B) 44102】、金黄色葡萄球菌（ Staphylococcus）【 CMCC(B)26003】、乙型付伤寒沙门菌（ Salmonella paratyphi B）【 CMCC(B) 50094】、铜绿假单胞菌（ Pseudomonas aeruginosa）【 CMCC (B) 10104】 验证实验所用的菌株传代次数不得超过 5 代 （从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为0 代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。 菌液制备 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型付伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至 10ml营养肉汤培养基中， 35～ 37℃ 培养 18～ 24 小时；分别取培养液 1ml 加 %无菌氯化钠溶液，采用 10 倍递增稀释法，稀释至 105～ 107，制成每 1ml 含菌数 10～ 100cfu 的菌悬液。 阴性菌对 照组 设立阴性菌对照组是为了验证该控制菌检查方法的专属性。 方法同试验组，验证大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌检查法时的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌；验证铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌检查法时的阴性对照菌采用大肠埃希菌。 阴性对照菌不得检出。 试验组 常规法 方案编号： JiLinGuoYuan 微生物限度检验方法 验证方案 第 8/16 页 大肠埃希菌 取相当于 1g 或 1ml 供试品的供试液至 100ml 胆盐乳糖培养基中，阳性菌对照加入大肠埃希菌 10～ 100cfu，阴性菌对照加入金黄色葡萄球菌 10～ 100cfu， 35～ 37℃培养 18～ 24 小时，取此培养物按《微生物限度检查 SOP》大肠埃希菌项下规定检查。 大肠菌群 取含适量（不少于 10ml）的胆盐乳糖发酵培养基管 3 支，分别加入含供试品 1g 或 1ml 、 或 、含供试品 或 的供试液，阳性菌对照加入大肠埃希菌 10～ 100cfu，阴性菌对照加入金黄色葡萄球菌 10～ 100cfu， 35～ 37℃ 培养 18～ 24小时，按《微生物限度检查 SOP》大肠菌群项下规定检查。 沙门菌 取供试品 10g 或 10ml，直接或处理后接种至适量（不少于 200ml）的营养肉汤培养基中，用匀浆仪或其他适宜方法混匀，阳性菌对照加入沙门菌 10～ 100cfu，阴性菌对照加入金黄色葡萄球菌 10～ 100cfu， 35～ 37℃ 培养 18～ 24 小时。 按《微生物限度检查SOP》沙门菌项下规定检查。 铜绿假单胞菌 取相当于 1g或 1ml 供试品的供试液至 100ml 胆盐乳糖培养基中，阳性菌对照加入铜绿假单胞菌 10～ 100cfu，阴性菌对照加入大肠埃希菌 10～ 100cfu， 35～ 37℃培养 18～ 24 小时。 按《微生物限度检查 SOP》沙门菌项下规定检查。 金黄色葡萄球菌 取相当于 1g 或 1ml 供试品 的供试液至 100ml 胆盐乳糖培养基中，阳性菌对照加入金黄色葡萄球菌 10～ 100cfu，阴性菌对照加入大肠埃希菌 10～ 100cfu， 35～37℃ 培养 18～ 24 小时。 按《微生物限度检查 SOP》金黄色葡萄球菌项下规定检查。 培养基稀释法 供试品有抑菌作用，放大培养基量，由 1： 100 放大到 1： 300、 1：500 或 1： 1000，由于容器体积限制，一般放大到 500ml 或 1000ml，本法适用于抑菌作用不强的样品。 薄膜过滤法 采用薄膜过滤法时，取规定量供试液，过滤，冲洗，试验菌应加在最后一次冲 洗液中，过滤后，注入培养基或取出滤膜接入增菌培养基中。 离心沉淀集菌法 取规定量供试液，如供试液含许多药渣，先以 50。