a-淀粉酶发酵的生产工艺

a-淀粉酶发酵的生产工艺内容摘要：

h后 1： ，培养时间为 28～ 36 h。 （二）此培养基的制备 发酵培养基：蛋白胨 5g，酵母膏 ，葡萄糖 ,可溶性淀粉 ， KH2PO4 1g， ， ， H2O 500mL，。 分装于 100mL锥形瓶中，每瓶 50mL， 121℃ 灭菌 20min。 接种环灼烧灭菌后，轻轻刮取斜面种子培养基中的少量菌体，接入液体培养基中，并使环在液体与管壁接触的部位轻轻摩擦，使菌体分散于液体中。 37℃ 振荡培养 48 h。 将发酵液置高速冷冻离心机中 10000r/min 离心 10 min，除菌体，上清液即为α－ 淀粉酶粗酶液。 2 α淀粉酶的菌种选育 α淀粉酶生产：以枯草芽孢杆菌 14140 为出发菌株 ,经亚硝基胍反 复多次处理10 10 10 和筛选生产 α淀粉酶。 分离纯化：以 CTAB/正丁醇 /异辛烷构成反胶团系统 ,通过反胶团萃取方式纯化精制 α淀粉酶。 最佳反应条件为：萃取温度 40℃，水相组成为 NaCl0. 03 mol/L， pH 12. 0，有机相：无机相 =1∶ 2，振荡时间 10 min；反萃取最佳条件为：温度 60℃，水相组成为 KCl3 mol/L， pH 4. 0，有机相∶无机相 =2∶ 1，反萃取振荡时间 10 min。 在上述条件下，经过一个萃取与反萃取循环后， α淀粉酶的萃取率最高可达 90. 78%。 菌株与培养方法 培养基 BY 斜面培养基每 100 g 含可溶性淀粉 1 g ，牛肉膏 1 g，蛋白胨 1 g，酵母膏 g， NaCl g，琼脂 2 g. BY 发酵培养基每 100 g 含可溶性淀粉 5 g，牛肉膏 1 g，蛋白胨 g，酵母膏 g， NaCl ， CaCl21 g。 调节 ，经 121℃，灭菌 30 min，备用。 仪器设备 全自动高压灭菌锅、培养皿、恒温培养箱、超净工作台、恒温摇床、离心机、分光光度计、恒温水浴锅、移液管、 PH 试纸、吸耳球、玻璃棒、量筒、试管、试管架、酒精灯、电子天平、三角烧瓶、洗瓶、接种针、接种环、直尺、记号笔等。 2. 2 实验方法 2． 2． 1 细菌的分离与初步鉴定： 将土壤系列稀释，把 103 、 10 105 分别涂布到淀粉培养基上， 27℃倒置培养 2 天，将长出的菌落接入斜面。 将细菌从斜面接种到淀粉培养基培养 2 天，用碘液染色，记录透明 圈大小和菌落直径，计算 D/d 值。 保菌供下次实验用。 2． 2． 2 紫外线诱变育种： 取活化后的菌种配成 菌悬液、稀释；倒淀粉培养基平板，将菌悬液涂布其表面；用紫外线处理平板 0、 2min、 4min、 6min、 8min、 10min，每个处理 2 次重复；放到黑暗中倒置培养， 37℃培养 48h，分别计数诱变组和对照组平板上的菌落数，并计算致死率；加入碘液，分别测量诱变组和对照组菌落的透明圈直径和菌落直径，计算 D/d 值；将 D/d 值最大的菌种保存到斜面培养基上。 诱变方法以及变异菌株的筛选 10 10 10 ①诱变出发菌株在完全培 养基中培养至对数生长期后期。 ② 以 NTG为诱变剂，按一定处理剂量 (μg/ml)，在一定 pH值的缓冲液中 30℃恒温振荡处理 1~4 h。 ③经高速离心分离，移植于液体完全培养基进行后培养。 ④经稀释涂布在含有 1%淀粉 BY 固体培养基上，经 24 h。