第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备

第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备内容摘要：

不同表位特异的 ,用竞 争抑制法，相加指数法及微机集群分析 亲和性测定： 测定亲和常数 K 杂交瘤细胞染色体： 秋水仙素裂解法，小鼠 B细胞染色体40条， SP2/0细胞 68条，杂交瘤细胞一般 100多条 McAb靶抗原分子量： 常用 western blot 三、 单克隆抗体的性质鉴定 四、单克隆抗体的特性 高度特异性 高度的均一性和可重复性 弱凝集反应和不呈现沉淀反应 对环境敏感性 （一）单克隆抗体的特性 优点 ： 在体外 “ 永久 ” 地存活并传代 用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。 适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法 可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗 （二）单克隆抗体的优点与局限性 局限性 ： 固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围反应强度不如多克隆抗体 制备技术复杂、费时费工、价格较高 McAb PcAb 抗原要求 可以不纯 纯度高 得量 高 低 特异性 高 低 稳定 低 高 沉淀反应 无 有 成本 高 低 McAb与 PcAb的比较 McAb and PcAb 第三节 基因工程抗体制备 基因工程抗体 (Geic engineering antibody) 根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。 主要包括嵌合抗体、单链抗体、人源化抗体、双价抗体和双特异性抗体。 将小鼠 Ig基因敲除，转染人 Ig基因，在小鼠体内产生人 Ab，再经杂交瘤技术，产生大量完全人源化抗体 一、人源化抗体 方法： 从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人 Ig恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人鼠嵌合抗体 特点： 减少了鼠源性抗体的免疫原性 保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力 （一）嵌合抗体 嵌合抗体 定义： 指利用基因工程技术，将人抗体可变区（ V）中互补决定簇（ CDR）序列改换成鼠源单抗 CDR序列。 重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。 RAb亦叫 “ 重构型抗体 ” ，因其主要涉及 CDR的 “ 移植 ” ，又可称为 “ CDR移植抗体 意义： 多种特异的鼠源单抗有可能应用于临床治疗 （二）改型抗体 Fab： 抗原结合片断 Fv： 可变区片段 ScFv： 单链可变区片段 SdAb： 单区抗体 二、小分子抗体 小分子抗体 其它生物活性蛋白融合 三、抗体融合蛋白 许多抗原抗体反应要求双价的抗原结合位点，使抗原分子上的两个表位交联或使两个抗原分子连接。 将识别肿瘤抗原的抗体和识别细胞毒性免疫效应细胞表面分子的抗体连结在一起，可使效应细胞更容易与肿瘤细胞结合识别，取得杀伤肿瘤细胞的作用。 四、双特异性抗体 分别分离纯化两种不同的 McAb，使各抗体解离为单价抗体，再使两种不同抗原特异性的单价抗体通过化学试剂交联起来，然后分离出目的组分。 此法缺点是容易导致抗体失去活性，产物均一性不佳。 化学交联 BsAb 将两种分泌不同特异性。