第十七章流式细胞仪分析技术及应用

第十七章流式细胞仪分析技术及应用内容摘要：

选后得到目的细胞的实际得率。 与分选速度成反比。 （二）分选的技术要求 • 参数： FS,SS,FL • 数据显示方式 （单参数直方图 、双参数散点图 、二维等高图 、假三维等高图 、三参数散点图 ） • 设门分析技术 第二节 数据的显示与分析 FS：反映颗粒的大小 SS：反映颗粒的内部结构复杂程度 FL：反映颗粒被染上的荧光数量多少 一、 参数 • 单参数直方图 • 双参数直方图 :点图 二维等高图 假三维等高图 • 三参数直方图 • 多参数分析 直分析方图 设门分析 :REGION和 GATE设置 二、数据显示方式 由一维参数 (散射光或荧光 )与颗粒计数(COUNT)构成，反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。 （一）单参数直方图 单参数直方图 细胞相对数量 信道(channel ) • 双参数直方图：纵轴和横轴分别代表被测量细胞的两个测量参数，根据这两个参数就可以确定细胞在图上的表达位置。 • 双参数信号 通常采用对数信号，最常用的是点密图，在图中，每个点代表一个细胞，点图利用颗粒密度反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。 （二）双参数直方图 绿色荧光强度 红色荧光强度 双参数直方图点图 2. 二维等高图 • 由类似地图上的等高线组成，其本质也是双参数直方图。 • 等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数，即 “ 等高 ”。 • 曲线层次越高 (越里面的线 ) 所代表的细胞数愈多。 • 等高线越密集则表示细胞数变化率越大。 二维等高图 3. 假三维等高图 （三）三参数直方图 多参数分析：当细胞标记了多色荧光，被激发光激发后，得到的荧光信号和散射光信号可根据需要进行组合分析。 （四）流式细胞仪的多参数分析 Gate设置：指在某一张选定参数的直方图上，根据该图的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并要求该样本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况。 根据门的形状又分为了线性门、矩形门、圆形门、多边形门、任意形状门和十字门。 三、设门分析技术 A 淋巴细胞 B 单核细胞 C 中性粒细胞 A、 B、 C均为任意门 线性门 • Region设置 : 区阈（ region, R）与门 (gate, G ) 是两个相关的概念，区阈可与门对应，但是也可以包含于门。 D1 CD4+/CD3 D2 CD4+/CD3+ D3 CD4 /CD3 D4 CD4 /CD3+ 如十字门分析时，起就可以由四个区域构成，即G=D1+D2+D3+D4。 • 样本制备 • 标记染色 • 液相芯片技术 • 质量控制 第四节 流式细胞仪免疫分析的技术要求 外周血淋巴细胞样品的制备 分离单个核细胞 培养细胞的样品制备 蛋白酶消化 机械吹打 使贴壁细胞脱落 洗涤 尼龙网过滤 单细胞悬液 一、免疫检测样品制备 新鲜实体组织单细胞悬液的制备 • 机械法 • 酶处理法 • 化学试剂处理法 • 表面活性剂处。