第十二章免疫检测原理及方法内容摘要:

(2)酶联免疫电泳转移印迹法 (WesterbBlot) (3)斑点免疫结合试验 (DotELISA) 3. 放射免疫测定法 原理是待测抗原和标记抗原与定量的相应抗体发生竞争性结合。 待测抗原是动物内的某种微量活性物质 ,如细菌和寄生虫的可溶性抗原 、 激素类 、 细胞内信使如cAMP、 cGMP和前列腺素 E等。 标记抗原是将已知的上述物质标记上放射性同位素(125I、 131I 3H、 4C、 32P)。 将标记抗原 (Ag)和未标记抗原 (Ag)按比例混合 , 再使两者与定量的相应抗体 (Ab)发生竞争性结合 , 也即竞争抑制反应。 第二节 免疫细胞的检测 参与免疫应答的细胞有多种 , 如负责体液免疫的 B细胞 , 执行细胞免疫的 T细胞和沟通体液免疫和细胞免疫的其他细胞等。 T细胞 、 B细胞表面具有特异性抗原和多种受体 , 据此建立了相应的检测方法 , 以鉴定和计数动物外周血液和淋巴样组织中的 T细胞 、 B细胞及其功能。 一、免疫细胞的定量检测 (一 )T细胞的定量检测 检测 T细胞数量最早和最普及的试验是红细胞花环试验 , 按花环阳性淋巴细胞百分率表示。 目前 , 可通过检测 T细胞表面 CD抗原 , 了解外周血 T细胞数量或亚群的变化。 从外周血分离出富含的单个核细胞制合成适当数量的细胞悬液 , 分放在 3个小试管中 ,分别用抗 CD CD4和 CD8的单克隆抗体作为第一抗体进行结合 , 再用 F。
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