sds-page电泳培训资料内容摘要：
不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。 + 2. 样品如何处理。 根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原 SDS处理、非还原 SDS处理、带有烷基化作用的还原 SDS处理。 1）还原 SDS处理：在上样 buffer中加入 SDS和 DTT（或 Beta巯基乙醇）后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成 SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。 一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样 Buffer，离心，沸水煮 5min，再离心加样。 2）带有烷基化作用的还原 SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护 SH基团，得到较窄的谱带；另碘乙酸胺可捕集过量的 DTT，而防止银染时的纹理现象。 100ul样品缓冲液中 10ul 20％的碘乙酸胺，并在室温保温 30min。 3）非还原 SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品，一般只用 1％ SDS沸水中煮 3min，未加还原剂，因而蛋白折叠未被破坏，不可作为测定分子量来使用。 + 3. SDSPAGE电泳凝胶中各主要成分的作用。 聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关； 制胶缓冲液：浓缩胶选择 ，分离胶选择 ，选择 tris－ HCL系统， TEMED与 AP： AP提供自由基， TEMED是催化剂，催化自由基引起的聚合反应进行；十二烷基硫酸钠（ SDS）：阳离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。 4. 提高 SDSPAGE电泳分辨率的途径。 聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝胶的分辨率。 建议做法：待凝胶在室温凝固后，可在室温下放臵一段时间使用。 忌即配即用或 4度冰箱放臵，前者易导致凝固不充分，后者可导致 SDS结晶。 一般凝胶可在室温下保存 4天， SDS可水解聚丙烯酰胺。 一般常用的有氨基黑、考马斯亮蓝、银。阅读剩余 0%
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