crisprcas9技术的原理及应用内容摘要:

ockout ) 通过同源重组实现基因打靶并实现目的基因的缺失或破坏,使其失去原有功能 • 新技术( Cas9) 通过特异性 RNA序列( gRNA for Cas9) ,引导核酸内切(endonuclease)在靶基因处切割,引起靶基因产生 DSB(双链缺口),机体修复 DSB的方式有两种 :NHEJ, HDR。 NHEJ用于 Cas9 KO项目, HDR用于 Cas9CKO,KI项目 Cas9与 KI • 2020年 1月 29日在 《 nature biotechnology》 上发表的 《RNAguided editing of bacterial genomes using • CRISPRCas systems》 一文中,作者利用 CRISPRCas系统用设计好的 DNA模板替换的相应基因来达到基因的定向修饰。 • 根据修复方式 不同,我们应用 TALEN及 Cas9核酸内切酶活性时进行基因打靶时主要分为两个方向 • 基因敲除 • 基因定向修饰(本质等同于 KnockIn) • 两者的区别,都是利用同源重组发生基因的定向插入,优势:机体在修复 DSB时,如果提供模板,则同源重组效率较只。
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