饲料化验员手册

饲料化验员手册内容摘要：

摇匀后放入 样品 +40ml 磷酸缓冲液 30℃ 恒温水浴槽中，每 5min 摇匀一次，反应 30min，在 5min 内测定 pH 值。 5. 计算：尿素酶活化度（ pH 值上升值） =试样的 pH 测定值 空白的 pH 值 方法二 尿素酶快速测定法 —— 酚红法（参考法） 1. 称取 经磨细的豆粕样品放置试管中，注入 2%尿素 1ml，开始计时，加入指示剂苯酚 2 滴，再加入 8ml 蒸馏水，（ 2030s）开始震摇试管约 10s，直至全脂豆粕浮在液体层，每摇动 10s 约等待 3s，再观察溶液层颜色，如果出现粉红色，计下时间，与尿素酶活性表对照，如果颜色不变，则再摇 10s 约等待 3s，然后再观察溶液层颜色，重复操作，如一直不变，再重头开始。 （做实验以前，要先做空白实验，如果呈粉红色则指示剂已经不能用，重新配置指示剂。 震摇停止后观察溶液的颜色时要等 3s，不可太快或太慢，否则会看错 ，晚间不能做该实验。 时间（ min） 豆粕尿素酶活性 01 以上 12 23 56 67 79 12 无色 0 方法三：尿素酶活性快速测定法 —— 酚红法（粗略法） 1. 原理：尿素酶 + 尿素 氨气（用酚红作指示剂） （ 1） N 氢氧化钠 ：称 氢氧化钠溶于 100ml 水中。 （ 2） 硫酸：将 浓硫酸加入 1000ml 水中稀释。 （ 3） 尿素 — 酚红溶液： 酚红溶于 35ml 水中 + 氢氧化钠 14 混合 硫酸滴定 琥珀色 21g 尿素溶于 300ml 水中 2. 方法：将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿中，将已调好的尿素 —— 酚红溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全锦湿，停留 5min，观察豆粕的红色反应。 少量 红点 微量活跃（△ pH=） 约 25%红点 中度活跃（△ pH=） 约 50%红点 活跃（△ pH=） 约 75%红点 非常活跃（△ pH≧ ） 5min 没红点出现，停留 25min 任无 豆粕过熟 实验十 氯化胆碱含量的测定 一 . 70%氯化胆碱水溶液中氯化胆碱含量的测定 ：乙酸汞 + 氯化胆碱 氯化汞 + 乙酸盐 高氯酸 滴定 （ 1） 冰乙酸：优级纯 （ 2） 乙酸汞试液： 50g/L，取 5g 乙酸汞研细，加 100ml 温热的冰乙酸溶解 （ 3） 结晶紫指示剂： 2g/L，取 结晶紫，加 100ml 冰乙酸 （ 4） 高氯酸标准溶液（ ） 样品 + 20ml 冰乙酸 +2ml 乙酸酐 +10ml 乙酸汞试液 + 2 滴结晶紫指示液 摇匀，用高氯酸标准溶液滴定至溶液呈纯蓝色，同时进行空白测定。 氯化胆碱 % = 100 式中： c0—— 高 氯酸标准溶液的浓度 V—— 滴定试样时消耗的高氯酸溶液体积 V0—— 滴定空白时消耗的高氯酸溶液体积 M—— 试样的质量 二 次平行测定结果绝对差值不大于 %，取其平均值 二 . 50%氯化胆碱粉剂中氯化胆碱含量的测定： 原理，试样制备不同，其余与一同 1. 原理： 将样品中的氯化胆碱用甲醇萃取出来，蒸发掉溶剂后，再用非水滴定法测定其中的氯化胆碱含量。 2. 试样的制备 称取在 105℃下干燥 3h的样品 ，置于 250ml锥形瓶中，加 40ml甲醇，充分摇动 30min后过滤，再用约 20ml 甲醇洗涤沉淀 4 次，将滤液和洗液合并，在水浴上蒸发至干，备用。 CO （ VV0） m 1000 15 3. 测定： 试样加微热冰乙酸 20ml 后，按一 .3 程序操作测定。 允许平行差值不大于 %，取其 平均值。 三 . 50%氯化胆碱粉剂中氯化胆碱含量的快速测定 105℃下干燥 3h 的样品 置于 250ml 的锥形瓶中， +40ml 冰乙酸 ，在电炉上加热保持微沸 10min， + 2ml 乙酸酐 +2 滴结晶紫指示剂，在用高氯酸标准溶液滴定至溶液呈纯蓝色。 实验十一 油脂酸价的测定 1. 原理： 用中性乙醚 乙醇混合溶液溶解油脂及其脂肪酸，再用碱标准溶液滴定。 2. 试剂准备 （ 1） 中性乙醚 乙醇混合溶液：乙醚与乙醇 2： 1 混合，临用前以酚酞为指示剂，用 氢氧化钠标准溶液滴定至中性。 （ 2） 的氢氧化钾标准溶液 3. 测定 35g 样品 + 中性乙醚 乙醇混合液 50ml + 3 滴酚酞指示剂 氢氧化钾滴定 淡红色 4. 数据处理 酸价 = —— 氢氧化钾的摩尔质量 实验十二 油脂过氧化值的测定 ： 油脂中的过氧化物 + 碘化钾 碘用硫代硫酸钠滴定 （ 1） 氯仿 冰乙酸混合溶液：氯仿 40ml 加冰乙酸 60ml，混匀 （ 2） 饱和碘化钾溶液：取碘化钾 5g，加水 10ml （ 3） （ 4） %淀粉指示剂 23g 试样，注入 250ml 碘量瓶中，加入 30ml 氯仿 冰乙酸混合溶液，振摇使试样溶解，加1ml饱和碘化钾溶液，加塞后摇匀，在暗处放置 3min，取出加水 100ml，摇匀后立即用 的硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色，加 %淀粉指示剂 1ml，滴定至蓝色消失为止，再做空白实验。 过氧化值 %（以碘 %表示） = —— 与 1mlmol/l 硫代硫酸钠标准溶液相当的碘的克数 氢氧化钾溶液浓度消耗氢氧化钾体积 试样的质量 （耗硫代硫酸钠体积 空白耗其体积）其浓度 试样的质量 16 实验十三 鱼粉掺假检测及真蛋白质的测定 一 .鱼粉中掺尿素的测定 1. 原理 尿素 尿素酶 氨态氮 甲酚红 红色与尿素含量成正比 2. 定性测定 试剂： %甲酚红指示剂， 甲酚红溶于 100ml95%乙醇中 方法一： 5g 鱼粉加入二支试管中，其中 1 支加入少许黄豆粉，各加蒸馏水 5ml，振摇后置 6070℃水浴中放 30min，取出后滴加 6滴 %甲酚红指示剂，如果加黄豆粉的试管出现深紫红色，说明掺有尿素，无尿素呈黄色或棕黄色 方法二 ： 取鱼粉 2g 于烧杯中，加水 20ml，搅 拌后放置几分钟后过滤，取样品滤液 2ml 于白色蒸发皿中，加 3 滴 %甲酚红指示剂，再加 6 滴黄豆液（ 5g 黄豆粉加水 100ml 浸泡 1h，取其滤液），静置 5min，若有尿素存在即呈深紫色且散开象蜘蛛网样。 无尿素呈黄色。 3. 定量测定 （ 1）试剂 1) 对二甲氨基甲醛（ DMAB）溶液：溶解 于 100ml 无水乙醇中加 10ml 浓盐酸摇匀。 2) 尿素标准溶液：储备液，称取 尿素，用水稀释至 100ml ：量取 10ml 储备溶液稀释至 100ml ：量取 10ml 储备液 稀释至 50ml，再取此稀释液 10ml 稀释至 100ml 3) 乙酸锌溶液：溶解 （ AC） 2﹒ 2H2O 于水中，加入 3ml 冰乙酸，并稀释到 100ml 4) 亚铁氰化钾溶液：称取 （ CN） 用水稀释到 100ml 5) 磷酸盐缓冲液（ pH=7）：将 无水磷酸二氢钾和 无水磷酸氢二钾分别溶于100ml 水中，合并次二溶液，并稀释至 1000ml 6) 活性炭 （ 2）测定方法 a) 样品制备：样品粉碎到 20 目以下，称取 样品于 150ml 烧杯中，加入 1g 活性炭并准确移取 90ml 水，摇匀，放置 10min，再分别加入 5ml 乙酸锌溶液和 5ml 亚铁氰化钾溶液，搅匀并放置 30min，用滤纸过滤，滤液待用。 同时做空白实验。 b) 标准曲线绘制 测 1%以上尿素含量的样品，用 ，用 1cm 比色池；含量在 1%以下的样品，用 ，用 2cm 比色池。 分别取尿素标准液 5ml于 9个 25ml具塞比色管中，加水约 18ml，分别加入 DMAB 液 5ml，用水稀释到刻度，摇匀，放置 10min。 然后以 0ml标准管为参比，在 420nm 波长下，测 定吸光度。 以吸光度为纵坐标，尿素浓度为横坐标作图，图形应该为一条直线，否则重做。 17 C） 样品测定 准确移取一定量样品滤液（样品尿素含量在 1%以下取 15ml， 1%以上取 5ml）于 25ml 比色管中，以下操作同 b）。 由所测吸光度查标准曲线。 样品尿素含量在 1%以下时：尿素（ %） =2/3 （ C – C0） /m 样品尿素含量在 1%以上时：尿素（ %） =2（ C – C0） /m 式中： —— 分别是测定样品和试剂空白所查得的尿素含量， mg m—— 测定样品重， g 二 .鱼粉中掺入植物质、胺盐和 鞣革粉的化学检验 （１） 适用范围：适用于生产、加工、经销、调拨的饲料级鱼粉中掺入植物质、胺盐和鞣革粉的直接化学鉴别检验． （２） 试剂 1) 碘 2) 碘化钾 3) 间苯三酚 4) 二苯基卡巴腙 5) 碘化汞 化学纯 6) 氢氧化钠 7) 乙醇 8) 硫酸 9) ６ mol/l 氢氧化钠溶液 10) ２ mol/l 硫酸溶液 11) 碘－碘化钾溶液：取碘化钾６ g 溶于１００ ml 水中，再加入２ g 碘溶解摇匀． 12) 间苯三酚溶液：取间苯三酚２ g 加９０％乙醇到１００ ml 使溶解，摇匀 13) 二苯基卡巴腙溶液：取二苯基卡巴腙０ .２ g，加９０％乙醇１００ ml 使溶解，摇匀 14) 奈斯勒试剂：取碘化汞２３ g，碘化钾１ .６ g 于１００ ml 的６ ml／ l 氢氧化钠溶液中，混合均匀．倾取上清液放置到棕色瓶中保存． 15) 生豆粉：取新鲜干燥的大豆粉或刀豆粉碎后，过４０目，加盖保存． 16) 尿素酶溶液：称取尿素酶０ .２ g 溶于 50ml 水中 ,冰箱保存 . 17) 甲酚红指示剂 :称取 甲酚红溶于 10ml 乙醇中 ,溶解后再加乙醇到100ml. ( 3 ) 鱼粉中掺入植物质的检验 1) 原理 :植物质中含有木质素和淀粉 .木质素 +间苯三酚在强酸条件下反应 ,产生红色的化合物 ,淀粉与碘化钾反应可产生蓝色化合物 . 2) 方法 : 12g 鱼粉于 50ml 烧杯中 ,加入 10ml 水加热 5min,冷却 ,滴 入 2 滴碘 碘化钾溶液 ,观察颜色变化 ,如果溶液颜色立即变为蓝色表明试样中有淀粉存在。 另取鱼粉 1g 置于表面皿中，用间苯三酚溶液浸湿，放置 510min，滴加浓盐酸 23滴，观察颜色，如果试样呈深红色，则表明试样中含有木质素。 （ 4）鱼粉中掺入铵盐的检验 1) 原理：铵盐一般都含有氨态氮，奈斯勒试剂能与含氨态氮物质产生黄褐色沉淀，尿素在碱性条件下，由于尿素酶的催化作用，可生成氨态氮。 2) 检验方法：取鱼粉试样 12g 于试管中，加 10ml 水振摇 2min，静置 20min，取上 18 清液 2ml 到蒸发皿中，加入 1mol/l 氢氧化钠 溶液 1ml 置水浴上蒸干，再加水数滴和生豆粉约 10mg，静置 23min，加奈斯勒试剂 2 滴。 如试样有黄褐色沉淀产生则表明有尿素存在。 鱼粉中掺有铵态氮物质的检验方法：取鱼粉 12g，加水 10ml，振摇 2min，静置 20min，取上清液 2ml 加 1mol/l 氢氧化钠 1ml，加奈斯勒试剂 2 滴。 如试样有黄褐色沉淀表明有 NH4+存在。 （ 5） 鱼粉中掺入 鞣革粉的检验 1） 原理：用铬鞣制的皮革中 均含有铬，将鱼粉灰化，鞣铬中有一部分铬转化为 6价铬，在强酸性条件下， 6 价铬可与二苯基卡巴腙反应生成铬 二硫代卡巴腙的紫红色水溶性化合 物。 2） 方法：取鱼粉试样 13g 于坩埚中置于电炉上炭化到烟散尽，于 550660℃高温炉中灰化 30min，直到却变为灰白色，加入 2mol/l 硫酸溶液 10ml 搅拌，加二苯基卡巴腙溶液数滴，观察颜色变化，如紫红色表明鱼粉中掺有鞣革粉。 （ 6） 真蛋白的测定 方法一：盐析法 1) 试剂： I. 硫酸铜溶液： 10%，称取 硫酸铜加水溶解，并稀释到 500ml。 II. 氢氧化钠溶液： %，称取 氢氧化钠，加水溶解，并稀释到 500ml。 ：。 2） 测定 1g 样品 + 50ml 蒸馏水于 250ml 烧杯中，于电炉上加热煮沸，加入 20ml10%硫酸铜溶液，再在搅拌下缓缓加入 %氢氧化钠溶液，摇匀，从电炉上取下，室温下放置 2h。 沉淀物用中速定性滤纸倾泻法过滤。 并用少量 70℃以上热水多次洗涤烧杯和沉淀物，直至滤液无硫酸根离子（用 5%BaCl2 溶液。