第一节克隆载体内容摘要：
细菌时，只是 DNA侵入，然后利用细菌的酶来复制、转录、翻译。 λ DNA载体的构建 λ 噬菌体的缺陷： • 基因组太大（ ）； • 酶切点太多，它有 5个 BamH1位点（ G↓GATCC ）， 6个BgⅠ 位点（ A↓GATCT ）， 5个 EcoRⅠ 位点（ G↓AATTC ）。 • 野生型只能接纳一定长度的 DNA。 若相当于 λ 噬菌体的 75105%，那么只能接纳 5%=DNA。 • 重组的 λDNA 分子难于直接导入宿主细胞 — 利用体外包装成病毒颗粒，然后通过感染的方法注入 DNA。 切去部分非必须的区域； 抹去多余的限制性内切酶切割位点； 插入可供选择的标记基因； 建立体外包装系统。 构建 λ噬菌体克隆载体的基本策略： 插入型载体、取代型载体 根据切除的多少，将 λDNA分为两大类载体： 缩短长度 野生型 :上限 51kb λDNA： ，外源基因 λDNA上有 4050%的 DNA是复制，裂解所不必需的，切除便提高装载量。 插入型载体（ insertion vector） 经改造后 只具有 一个 可供外源 DNA插入的 克隆位点 ,长度为 37kb，为包装的下限，它本身也能被包装，允许插入片段最大为 14kb. 必须携带标记基因 取代型载体（ substitution vector） 具有 成对的克隆位点 ,空载的载体 DNA只 26kb，不能被包装，无法进入受体。阅读剩余 0%
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