不可忽视的细节—血液基因组提取内容摘要：
有些拭子的棉头剪不下来，可以将拭子在生理盐水里漂洗几次，离心得到沉淀再进行核酸提取。 3. 漱口水先进行离心得到沉淀再进行核酸提取。 DNA提取的原则 基因组提取方法 样本保存和前处理 基因组提取流程 DNA保存及检测方法 试剂选择原则 内容 基因组提取流程 加入吸附柱 缓冲液漂洗 DNA洗脱收集 样本裂解 纯化去蛋白 沉淀核酸 洗涤去盐 溶解 DNA沉淀 样本裂解 溶液法（盐析法） 吸附柱法 红细胞裂解 哺乳动物血液的红细胞中没有细胞核且核酸酶含量丰富，所以裂解红细胞对核酸提取非常重要。 红细胞裂解有两种方式： 采用红细胞裂解液进行裂解（通常红细胞裂解液按照 3倍全血体积加入进行裂解 ). 采用细胞裂解液进行裂解（ TIANGEN的细胞裂解液 CL是按照 体积），细胞裂解液将红细胞裂解的同时可以裂解白细胞，得到的为细胞核沉淀，更方便基因组 DNA的提取。 红细胞裂解充分的现象： 得到的沉淀应为白色沉淀或淡粉色沉淀。 有时血液需要进行两次裂解，注意第二次加入裂解液后需要将沉淀 votex彻底混匀。 核细胞裂解 如果有裂红的步骤，请尽量将上清去除再加入裂解液。 加入裂解液（如： TIANGEN试剂盒中的 GB或 FG）和蛋白酶 K需要彻底混匀。 将沉淀打散混匀后再进行水浴。 水浴时看到溶液变清，没有粘稠物或沉淀时即可进行下步操作，通常水浴时间 1030min. 若采用有机（酚 /氯仿）抽提时应充分混匀，动作要轻柔。 离心分离两相时，应保证一定的转速和时间，且吸取上清时注意不要吸取到中间层及有机相。 核酸吸附或沉淀 硅胶膜吸附法 1. 加入乙醇颠倒混匀后可能会出现絮状沉淀，动作要轻柔。 2. 将裂解的溶液和絮状沉淀全部加入到吸附柱里，此时的溶液应是高盐低 pH值的。 通过硅胶膜特异吸附核酸的特性将裂解溶液中的核酸吸附到硅胶膜上。 溶液法 1. 当沉淀时间有限时，用预冷的异丙醇沉淀，沉淀会更充分。 2. 加入异丙醇颠倒混匀后应出现丝状沉淀，动作要轻柔，避免基因组因过于猛烈的外力而降解。 3. 分离沉淀的方法： ； ，应保证一定的转速和时间。 核酸洗脱或溶解 硅胶膜吸附法。阅读剩余 0%
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