实验二酶促反应动力学实验内容摘要:
表稀释基质液 1ml ( 1) ( 2) ( 3) ( 4) ( 5) ( 6) ( 7) ( 8) ( 9) pH10碳酸钠缓冲液( ml) 混匀 , 37 ℃ 水浴保温 5分钟左右。 酶液( ml) pH10碳酸钠缓冲液( ml) 0 10/16 10/14 10/12 10/10 10/8 10/6 10/4 10/2 加入酶液后 立即 计时,各管混匀后在 37 ℃ 准确 保温 15分钟。 保温结束, 立即 加入。 各管分别加入 % 4氨基安替比林 ml及 % 铁氰化钾 ml,充分混匀,放置 10分钟,以管 1为对照,于波长 510 nm处比色。 酶活性计算及 Km值求取 在 37176。 C下保温 15分钟产生 1mg酚为 1个酶活性单位,从标准曲线查出释放的酚量( ug),以此计算处各管的酶活性( v)。 以 1/v为纵坐标、 1/S为横坐标,在坐标纸上作图,求出酶的 Km值。 A v 1/v 1/S Km=。 四、抑制剂对酶促反应的影响 抑制剂 ↑ 无抑。实验二酶促反应动力学实验
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