植物细胞组织培养技术

植物细胞组织培养技术内容摘要：

、有机 物 、生长调节剂等 ， 个别生长调节剂要随配随用。 蒸 馏 水、 pH试纸 蔗 糖、琼 脂 等 1 mol/L NaOH 溶液、 1 mol/L HCl溶液。 二 、方法和步骤 1 量取所配培养基总 体 积的 2/3体 积 的蒸 馏 水 ， 如要配 l升培养基 , 先量取约700 ml体 积的水。 2 根据培养基配方 ， 用量筒量取所需要的各种元素的母液。 物质 加入体积或重量 大量元素母液 (10 ) 100ml 微量元素母液 (1000 ) 1 ml 有机 物质母液 (1000 ) 1 ml 铁盐母液 (1000 ) 10 ml 蔗糖 30 g 琼脂 8 g 6 吸取母液 时， 注意应先将几种母液按顺序 排 好 ， 不 要 弄错以免使培养基中药品成分发生改变。 在培养不同的外植体时，应加入不同的激素，如本实验中培养康乃馨侧芽或茎段时就加入 1ml的 1 mg/ml的 6BA；而另一个实验胡萝卜愈伤组织培养中应加入 2ml的 1 mg/ml的 2,4D。 加入一种母液后应先搅拌均匀，避免因不均而使局部浓度过高而引起沉淀，琼脂可于加入蔗糖调节完 pH值后再加入，此时应注意搅拌，以免琼脂或蔗糖沉 淀于烧杯底而炭化。 加热至沸腾片断，以使琼脂充分溶解，检查时可注意烧杯内溶液是否透明。 3 调节培养 基 的 pH值 ， 用 pH计或 pH试纸测定 培养 基 的 pH按照培养材料的要求分别用 1 mol/L NaOH溶液、 1 mol/L HCl溶液来调节所配制培养基的 pH值 ， 一般培养 基 的 pH值约为 ， 培养的材料不 同， 对培养 基 的 pH值要求也不同。 4 分装 将配制好的培养基分别装在事先洗净 的 三角瓶 ， 用 锡铂 纸封口 ，注明标签 ， 然后 和用牛皮纸或报纸包好的培养皿及用三角瓶装好的蒸馏水一道进 行高压灭 菌。 5 培养基的灭 菌 一般用 手提式 医用高压锅来灭菌 （方法略），本实验采用全自动高压灭菌锅。 6 培养基的保存 消毒过的培养基通常放在接种室或培养室中保存，一 般 应在消毒后的两周内用完 ，最好不要超过一个月。 三、注意事项 激素应在调节 pH 之前加入，因为有些激素是用酸或碱溶解的，在调节 pH好之后加入会改变 pH 值。 pH 过酸或过碱对培养基均是不利的，会导致过软或过硬的结果，从而影响培养质量。 在本次实验中将下次实验所需的其它材料一同灭菌处理。 7 实验三 康乃馨的离体 快 繁 一、 仪器 设备和试 剂 超净工作台 、 带有吸水纸的成套的培养皿，无 菌水 培养基 N6+1 mg/L 6BA 剪刀、枪型镊子 量筒 、 酒精灯、滤纸、蒸 馏 水、小刷子 95%乙醇、 70%酒精、 70%酒精棉球、 %升 汞 、甲 醛 、 高锰 酸。