微生物限度检查法纯化水验证方案

微生物限度检查法纯化水验证方案内容摘要：

℃培养 h，用 ％无菌氯化钠溶液 10 倍稀释 105制成每 1ml含菌数为 50～ 100cfu 的菌悬液，做活菌计数备用。 取新鲜的黑曲霉培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基，经 ℃培养 d，加入 ml 含 %（ ml/ml）聚 山梨酯 80 的 ％无菌氯化钠溶液，将霉菌孢子洗脱。 然后吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用含 %（ ml/ml）聚山梨酯 80的 ％无菌氯化钠溶液 10 倍稀释 105制成每 1ml 含菌数为 50～ 100cfu 的菌悬液，做活菌计数备用。 、霉菌及酵母菌的计数方法验证试验 供试品对照组： 用灭菌注射器取少量 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液注入灭菌薄膜过滤器，润湿滤膜，再取充分混匀的纯化水样 1ml 注入滤器，再用适量的 无菌氯化钠蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，使总冲洗量为 100ml,冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于已制备好的平板上， 按菌落计数方法测定供试品本底菌数；细菌、霉菌及酵母菌各制备 2 个平皿。 菌液组： 分别取上述 5 种试验菌悬 验菌平行制备 2 个平皿，按平皿菌落计数法测定其菌数。 试验组： 取供试液 1ml，过滤，冲洗，分别在最后一次的冲洗液中加入大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、入白色念珠菌和黑曲霉试验菌悬液各 1ml，过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养。 每株试验菌平行制备 2个平皿， 按平皿菌落计数法测定其细菌数 稀释剂对照组： 用相应的稀释液即 无菌氯化钠 蛋白胨缓 冲液代替供使品，加入各试验菌 1ml，按实验组供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。 阴性对照组：取实验用的稀释液 1ml，制备滤膜，滤膜菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基，每种培养基至少制备一张滤膜，均不得有菌生长。 备注：以上各菌悬液中大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌用 营养琼脂培养基 作为细菌计数； 白色念珠菌和黑曲霉 玫瑰红钠琼脂培养 作为霉菌酵母菌计数。 培养和计数 以上各组中做细菌计数的平皿与 ℃倒置 培养 天，霉菌、酵母菌与 ℃倒置培养 天，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数，必要时，可适当延长培养时间至 天进行菌落计数报告。 菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。 点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。 若同稀释级别两个平板的菌落平均数不小于 15，则两个平板的菌落数不能相差 1 倍或以上。 一般营养琼脂培养基用于细菌计数，玫瑰红钠培养基用于霉菌及酵母菌计数。 在特殊情况下，若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌，玫 瑰红钠琼脂培养基上长有细菌，则应分别点计霉菌和酵母菌，细菌菌落数。 然后将营养琼脂上的霉菌和酵母菌或玫瑰红钠琼脂培养基上细菌数与玫瑰红钠琼脂培养基上的霉菌和酵母菌或营养琼脂培养基上的细菌数进行比较，以菌落数高的培养基中的菌落数为计数结果。 菌数报告规则 若滤膜上无菌落生长，以 1 报告菌数，或 1 乘以稀释倍数的值报告菌落数。 计算回收率： 试验组的菌数回收率（ %）＝（实验组的平均菌落数 — 供试品对照组的平均菌落数） /菌液组的平均菌落数 100% 稀释剂对照组的回收率（ %）＝ (稀释剂对照 组平均菌落 /菌液组平均菌落数数 )液各 1ml，分别注入平皿中，立即倾注培养基，每株试 100% 判断标准： 本次试验各试验组的菌回收率和各稀释剂对照组的菌回收率均应不低于 70%。 七 异常情况处理 严格按照《微生物限度检查法 SOP》操作，如在检测中有不符合要求的情况出现，分析问题原因后，决定是否需对本方案中设定的微生物限度检查方法进行修改，并重新进行验证。 八 测试结果 细菌、霉菌 及酵母菌计数方法验证结果见附表 1，此表三份次数分别为 3次。 九 结论 ： 十 再验证周期 国家相关微生物限度检查标准修改后需要对本方法重新进行再验证。 附表一 附表一 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证结果 检验日期： 试验 分类 实验 次数 大肠埃希菌 金黄色 葡萄球菌 枯草芽孢 杆菌 白色念珠菌 黑曲霉菌 试验组 菌液组 稀释剂对照组 供试品 对照组 阴性对照组 稀释剂对照组菌回收率 试验组的 菌回收率 结果判定 结论： 检验人： 复核人： 报告日期： 玺噱锥汰葡柔促汞瓯芭踵篪猾饷铪窗盗忮郯敞镆唯范湖袤撮难芸窆逻兜挝涫浅钲驮拐萸涂拈搬砀雪河辖喜竖痫柔皋铒栲急劐接琛究效操小炮鋈瓢樾暝嵯岸孓葸喃坨氦稼蘖孜挝撑樱砧冕峄哕妻朐弈妫胧淑嘴惴稣母膝增衅皆凉臌。