消毒剂效力及有效期验证方案

消毒剂效力及有效期验证方案内容摘要：

2 组菌落数比第 1 组菌落数多，但比第 5 组菌落数少，且符合下表要求 第 1 组平板平均菌落数 第 2 组平板平均菌落数 0 〉 5 x 〉 (x+5) Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 Doc. No./编号： 2020244712045 Page/页码： 10 / 23  第 5 组有相似菌落数生长，其每组间菌落数误差率不超过 15%。 计算公式如下： （ 3 组间菌落平均数 各组菌落平均数）的绝对值之和 误差率＝ ———————————————————————— 100％ 33 组间菌落平均数  第 6 组无菌生长。 否则，说明试剂有污染，应重新进行试验。 y 〉 (y+) . 中和剂鉴定试 验记录见附录 2。 . 定量悬浮试验 . 试验目的 由于 %的新洁尔灭溶液、 %新洁尔灭溶液、 60mg/L 二氧化氯溶液、 %醋酸洗必泰溶液、 %醋酸洗必泰溶液是通过浸泡或液封消毒， 通过定量悬浮试验，确定 其 消毒效力是否符合要求。 . 试验操作 . 配制 %的新洁尔灭溶液、 %新洁尔灭溶液、 60mg/L 二氧化氯溶液、 %醋酸洗必泰溶液、 %醋酸洗必泰溶液 ，操作执行《清洁剂和消毒剂管理》。 将配置好的消毒剂置 20℃ 177。 1 ℃ 恒温水浴锅中备用。 . 由于 %的新洁尔灭溶液 、 %新洁尔 灭溶液中低效消毒剂，且不能杀灭芽孢，故定量悬浮试验用菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌。 %醋酸洗必泰、 %醋酸洗必泰溶液 、 60mg/L 二氧化氯溶液 为高效消毒剂，能杀灭芽孢，故定量悬浮试验用菌枯金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌。 . 将菌液制备成 1108~5108CFU/ml 的工作菌液，菌液的制备及计数同。 . 将试管按需要分组排列在试管架上，试验组分 3 组（ 4min、 5min、 6min 各一组） ，并由左向右逐管标明消毒剂、中和剂、 10 102。 对照组分 1 组，并由左向右逐管标明 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 Doc. No./编号： 2020244712045 Page/页码： 11 / 23 稀释液、中和剂、 10 10 10 104。 . 向个试管加入 相应的试剂，标明 10 10 10 104。 加入 的稀释液。 . 吸取工作菌液 加入标明消毒剂的试管中，对照组加入标明稀释液的试管中，迅速混匀，并开始计时。 . 待菌液与消毒剂相互作用至 8min、 10min、 12min，吸取菌液和消毒剂混合液 ，加入标明中和剂的试管中，迅速混匀。 . 中和作用 10min 后，吸取 加入标明 101 的试管中，混匀后吸取 加入标明 102 试管中（对照组以此类推，对照组直至 104）。 . 试验组分别取中和剂管、 10 102 管溶液 1ml 按平皿法测定存活菌数；对照组取 10 1041ml 按平皿法测定存活菌数。 每管平行制备 2 皿。 . 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置于 30～ 35℃ 培养 3 天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置于 23～ 28℃ 培养 5 天计数计数。 . 结果计算 计算试验组和对照组的活菌浓度 （ CFU/ml），并换算为对数值（ N），并按下式计算杀灭对数值 : 杀灭对数值 (KL)＝对照组平均活菌浓度的对数值（ NO）－试验组活菌浓度对数值（ NX） . 可接受标准 杀灭对数值 (KL)应不低于 3~5 个对数单位。 . 定量悬浮试验记录见附录 3 . 表面试验法 . 试验目的 由于 75%乙醇、 40mg/L 二氧化氯溶液、 %新洁尔灭溶液是通过擦拭消毒， 故选用不锈钢载片和玻璃裁片进行表面试验法，确定 其 消毒效力是否符合要求。 . 菌种选择 由于 75%乙醇、 %新洁尔灭溶液中低效消毒剂，且不能杀灭芽孢，故定量悬浮试验用菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌。 40mg/L 二氧化氯溶 液 为高效消毒剂，能杀灭芽孢，故定量悬浮试验用菌枯金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌。 . 工作菌液制备 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 Doc. No./编号： 2020244712045 Page/页码： 12 / 23 工作菌液的制备方法、浓度及验证同步计数操作同。 . 试验操作 . （ 1） 染菌不锈钢载片制备 将经灭菌的载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌 含菌量为1108~5108CFU 的菌液 ，并均匀涂布于整个载体表面。 滴染菌液后，载片置超净工作台晾干后备用。 每种菌平行制备两个染菌不锈钢载片。 （ 2） 染菌 玻璃 载片制备 因培养皿的材质为玻璃，故用培养皿代替玻 璃 载片 进行 染菌 试验。 进行 菌液滴染 前，用记号笔在培养皿 菌液滴染 面的背面 画出染菌面积（ 50mm50mm） ，标注清晰。 菌液滴染 操作同 染菌不锈钢载片制备。 .  试验组： 将消毒剂擦拭在制备好的染菌载片上，消毒剂作用时间分别为 8min、 10min、 12min，不锈钢载片和玻璃载片每个作用时间分别制备 2 个。 作用结束后，用接触碟取样（接触碟规格： 55mm，取样面积为 25m2）。 取 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟（编号： BZW12085）； 取样 白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基接触碟（ 编号： BZW15129）。 接触碟取样方法：打开接触碟盖，使无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样面表面均匀接触 10 秒左右，在盖上跌盖。  对照组 对照组的活菌浓度计数见。 .  阴性对照： 用接触碟在 已灭菌的载片上（未染菌片的载） 按压 取样，操作同上。 每种载片及每种接触碟 平行制备两份。 . 培养 将取样 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌的接触碟倒置于 30～ 35℃ 培养 3 天计数； 取样 白色念珠菌的接触碟倒置于 23～ 28℃ 培养 5 天计数计数。 . 结果计算 计算试验组 和对照组的活菌浓度 （ CFU/ml），并换算为对数值（ N），并按下式计算杀灭对数值 : Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 Doc. No./编号： 2020244712045 Page/页码： 13 / 23 杀灭对数值 (KL)＝对照组平均活菌浓度的对数值（ NO）－试验组活菌浓度对数值（ NX） . 可接受标准 杀灭对数值 (KL)应不低于 3~5 个对数单位。 . 表面试验法记录见附录 5 . 现场考察试验 . 消毒前对洁净区进行表面微生物取样。 取样地点：固体车间（ D 级）的制粒间一墙壁和设备表面、小容量注射剂车间 (C 级 )的配液间墙壁和设备表面、灌封间层流罩（ A 级）下设备表面。 取样操作及检验执行《表面微生物检验》。 . 生产操作结 束后操作人员按照《生产区清洁》对洁净区进行清洁消毒。 . 清洁消毒完毕 15 分钟后，现场 QA 对清洁消毒后的洁净区进行表面微生物取样。 取样地点：固体车间（ D 级）的制粒间一墙壁和设备表面、小容量注射剂车间 (C 级 )的配液间墙壁和设备表面、灌封间层流罩（ A 级）下设备表面。 取样操作及检验执行《表面微生物检验》。 . 至少进行 3 次试验。 . 可接受标准 消毒后： A 级： 1CFU/25cm2 C 级： 25CFU/25cm2 D 级： 50CFU/25cm2 . 现场考察试验记录见附录 5 5. 消毒剂有效期确认试验 . 试验 目的 通过该试验，确定消毒剂在有效期内是稳定的，并且消毒效力不会变化，符合要求。 . 试验操作 . 配制 75%乙醇、 %新洁尔灭溶液、 %新洁尔灭溶液、 %醋酸洗必泰、 %醋酸洗必泰、 60mg/L的二氧。