安捷伦高效液相色谱仪最新验证方案

安捷伦高效液相色谱仪最新验证方案内容摘要：

测器：打开电源开关，检测器灯打开，并进行自检 6min，氘灯在三个内置波长 257nm、 521nm、656nm 处校准，若偏差小于177。 1nm，自检通过，若大于 1nm，出现自检错误提示。 泵流量设定值误差和流量稳定性误差的确认 a)测试条件：流动相：超纯水；色谱柱： 250mm；温度：室温。 b)测试方法： 启动仪器，以水作为流动相，待压力稳定后，在流动相出口处用称重过的 10ml 容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收收集五分钟流出的流动相，精密称定，每个流速 测定三次，记录测试温度，按下列计算流量设定值误差 S1和稳定性误差 S2。 SS = (Fm Fs) / Fs 100% SR =（ FmaxFmin） /Fm 100% 式中： SS为泵流量设定值误差（ %）； SR为流量稳定性误差（ %）； Fm=（ W2W1） /(ρ• t),为 流量实测值（ ml/min）； W2— 容量瓶 +流动相（ g）； W1— 容量瓶的质量（ g）； Fs— 流量设定值 ρ — 实验室温度下水的密度（ g/cm ）； t— 收集流动相的时间（ min）； Fm — 同一组测量值的算术平均值（ ml/min）； Fmax— 同一组测量中流量最大值（ ml/min）； Fmin— 同一组测量中流量最小值（ ml/min）。 c）测试标准： 流量设定值 F（ ml/min） 测量次数 3 3 3 收集流动相时间（ min） 25 15 10 允许误差 SS 5% 3% 3% SR 3% 2% 2% 梯度准确度的确认 a)测试条件： 流动相： %丙酮 水 检测波长： 254nm 流速： ： 30℃。 b)测试方法： 3 第 7 页 共 16 页 按下表设置梯度洗脱顺序，以两通代替色谱柱连接管路，先用超纯水冲洗系统，待基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线，测定三次，取各梯度级高度的平均值，由曲线图测量 100%B（ C）梯度级平均高度各梯度级实际体积 %，每个梯级的理论体积 %和实际体积 %之差即为梯度准确度，以最大差值为梯度准确度误差。 梯度洗脱表 时间 A 通道（ C 通道）：超纯水 B 通道（ D 通道）： %丙酮水溶液 100% 0% 100% 0% 0% 100% 0% 100% 20% 80% 20% 80% 40% 60% 40% 60% 60% 40% 60% 40% 80% 20% 80% 20% 100% 0% 24min 100% 0% c)测试标准：梯度准确度误差≤177。 1%。 自动进样器精密度的确认 a)测试条件： 流动相：甲醇 水（ 20:80） 对照品： 色谱柱： C18 色谱柱 检测波长： 320nm 进样量： 20181。 l 流速： 柱温： 37℃ b)测试方法： 对照品置于进样瓶，共进样 6 针，记录峰面积，求 6 针 RSD。 c）测试标准： RSD≤ % 自动进样器线性的确认 a)测试条件： 流动相：甲醇 水（ 20:80） 对照品： 色谱柱： C18 色谱柱 检测波长： 320nm 进样量：（ 1 20） 181。 l 流速： 柱温： 37℃ b)测试方法： 对照品置于 进样瓶，不同进样量各进一针，记录峰面积，求进样量与峰面积的相关系数。 c）测试标准：相关系数 r≥ 检测器波长准确度的确认 以水流过流通池做一空白扫描，然后以手动的方式将甲硝唑对照品用水稀释 10 倍后注入流通池，扫描 250nm400nm 波长范围内的吸收情况，得到甲硝唑溶液在紫外 — 可见光区的吸收光谱曲线。 记录其在 275nm、 300nm、 320nm、 350nm 附近波长处的最大或最小吸收波长，分别找出各点最大或最小波长与标 第 8 页 共 16 页 准波长之差即为波长示值误差；重复测定三次，各点最 小与最大之差即为波长重复性误差。 检测器波长的示值误差ζ 1 和重复性误差ζ 2 波长 275nm 附近（ max） 300nm 附近 (min) 320nm 附近 (max) 350nm 附近 (min) 实测波长 标准波长 272nm 302nm 320nm 360nm 测定次数 3 3 3 3 示值误差ζ 1 重复性误差ζ 2 基线漂移和极限噪声的检定 a) 测试条件： 流动相：甲醇 水（ 20:80） 对照品： 色谱柱： C18 色谱柱 检测波长： 320nm 进样量： 20181。 l 流速： 柱温： 37℃ b)测试方法： 将仪器各部分连接好，开机，记录基线 3040 分钟，计算基线漂移和噪声。 c）测试标准：基线噪声：≤177。 104AU；基线漂移：≤177。 104AU/hr。 检测器线性的确认 a)测试条件： 流动相：甲醇 水 （ 20:80） 对照品：（ 2 50、 100） 181。 g/ml 咖啡因对照溶液 色谱柱： C18 色谱柱 检测波长： 320nm 进样量： 20181。 l 流速： 柱温： 37℃ b)测试方法： 5 个浓度对照品置于不同进样瓶中，各进一针，记录峰面。