基因工程课后习题答案

基因工程课后习题答案内容摘要：

部分酶解整个基因组 DNA，得到大量的 DNA 片段，将这些片段与 载体连接，再转化到细菌中去，让宿主菌长成克隆。 这样 ，一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组 DNA 片段，整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。 cDNA 构建技术： 载体：普通质粒（表达型），受体细胞：大肠杆菌（繁殖迅速，易于保存，克隆操作简便，转化效率高） 提取细胞内总 RNA，用 Oligo(dT)探针分离其中的 mRNA，经反转录形成 cDNA，将单链 cDNA 变成双链，用合适的限制性内切酶进行酶切，与载体相连，转化宿主菌，挑选阳性克隆，形成文库 第三章 简述外源基因在大肠杆菌中高效表达的基本原理。 强化蛋白质生物合成，抑制蛋白产 物降解，维持或恢复蛋白质特异性空间构象 启动子：选用强启动子， 10 区和 35 区两个六聚体盒的碱基组成以及彼此的间隔长度（ 17bp），可控性启动子（ Lac 启动子） 终止子：强终止子， rrnT1T2， 否则会形成长短不一的 mRNA 混合物 SD 序列： 5’ UAAGGAGG339。 ,考虑 SD 序列与翻译起始密码子之间的碱基组成 密码子：更换外源基因中不适宜的相应密码子；将与外源基因密码子相关的 tRNA 编码基因同步克隆。 将外源基因至于这个可控的基因框架内 简述外源基因在大肠杆菌中几种主要的表达方式及其优缺点。 包含体型 异源蛋白的表达： 优点： 离心 , 蛋白酶不 再 构成威胁 缺点：包含体中的蛋白质中的氨基酸序列不具备正确的折叠结构，无活性 分泌型异源蛋白的表达： a) 通过蛋白质 N 端信号肽将蛋白质通过运输或分泌的方式定位在细胞周质（内膜与外膜之间的空隙）或直接分泌到培养基中的，称为分泌蛋白 b) 一些蛋白分泌到胞外，会增加其稳定性 c) 将大肠杆菌分泌型蛋白的信号肽与外源基因相连，转化分泌型受体细胞，则可获得分泌在培养基中的重组异源蛋白。 缺点：表达率要比包含体 方式低很多， 且大肠杆菌对真核生物的蛋白质分泌机制不健全，难以表达。 融合型异源蛋白表达 ： a) 外源基因 +受体菌自身蛋白基因 → 融合基因 → 表达融合蛋白（內源基因 N 端，外源基因 C 端） b) 优点： 1）增加了稳定性 2）便于体外纯化 3）表达效率高 缺点： 目的蛋白需要回收（需要裂解和进一步分离才能获得目的蛋白，还需要回收 ， 成本 较高 ） 简述大肠杆菌工程菌遗传不稳定性的主要表现形式及解决途径 a) 不稳定主要两种形式 i.。